糖化血紅蛋白五種檢測方法的評價.pdf

1、目的：糖化血紅蛋白(glycosylated hemoglobin，GHb)是糖尿病(diabetic mellitus，DM)患者的診斷、血糖監(jiān)測和藥物治療效果確定的有效指標之一，臨床上常用HbA1c的檢測代替GHb。目前，檢測HbA1c的方法很多，有高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)、電泳法、親和層析法、酶法和免疫法等。高效液相色譜法測定HbA1c具有準確性和重復

2、性高的特點，是檢測糖化血紅蛋白的金標準。本論文將HPLC法和另外四種方法進行比較及分析，為臨床醫(yī)師及各實驗室在選擇不同方法檢測糖化血紅蛋白時提供參考。
　　方法：實驗標本正常對照組65例，其中男33例，女32例，年齡40～57歲，體重指數(shù)18～24kg/m2為本院體檢無糖尿病的健康者；糖尿病患者64例，其中男33例，女31例，年齡45～66歲，體重指數(shù)18～24kg/m2。每一份標本在同樣條件下用五種方法檢測 HbA1c，記錄測定

3、結(jié)果，用于對比分析；選擇具有醫(yī)學決定水平的正常和異常濃度的樣本，分別采用5個樣本，批內(nèi)在同一天內(nèi)重復20次；批間分別在7 d內(nèi)進行10次測試。計算出批內(nèi)和批間的均值、標準差和CV值。收集HbA1c為10.0％的糖尿病患者的抗凝血，用0.9％的生理鹽水進行梯度稀釋，從低濃度到高濃度做直線回歸分析，觀察其線性范圍。將HbA1c為10.0%的全血標本用0.9％的生理鹽水進行1/5、2/5、3/5、4/5、5/5濃度稀釋，分別用五種方法檢測其H

4、bA1c濃度，然后分別在血標本中添加56 mmol/L葡萄糖、25 mmol/L三酰甘油、3.4 mmol/L膽紅素，并用低溫凍融方法制備輕度（Hb＜1g/L）、中度（Hb1～4 g/L）以及嚴重溶血標本（Hb＞5g/L）分別進行測試。在各種干擾物不同濃度的影響下，如果 HbA1c的值上下浮動0.3%，則將視為受到干擾。對比五種方法測定HbA1c的標本量和測定時間，以及回歸方程及相關(guān)系數(shù)。
　　結(jié)果：五種方法中除外硼酸親和法，其他

5、四種方法均符合要求；相對而言，HPLC法中D-10型全自動糖化血紅蛋白分析儀的精密度更佳。五種方法在4.0%～14.2%范圍內(nèi)線性良好，實測值與理論值的相關(guān)系數(shù)(r)在0.971～0.996之間，其中HPLC法最好。當加入各種干擾因素時，結(jié)果顯示HPLC法、酶法、膠乳凝集法測得的HbA1c值上下浮動<0.2%，可見性能穩(wěn)定、不易受到各種干擾物的影響。電泳法受溶血影響非常大，硼酸親合法中NycoCard Reader II多功能全定量特種

6、蛋白儀對溶血標本顯示濃度太低測不出數(shù)，脂血標本顯示濃度太高測不出數(shù)。通過標本量、測定時間、CV、r等指標進行比較，得出電泳法所采用的樣本量及測定時間均高于其他方法。酶法的r最接近1。
　　結(jié)論：HPLC法作為金標準，批內(nèi)和批間精密度在所采用的五種方法中是最好的，其次為酶法和膠乳凝集法，而硼酸親和法的重復性則相對較差，電泳法結(jié)果與實驗人員掃描和對電泳的波峰判斷有關(guān)，主觀隨意性較大，要求實驗人員技術(shù)嫻熟、經(jīng)驗豐富，否則結(jié)果差異較大。H