液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)鑒定小鼠肝臟和大鼠海馬組織質(zhì)膜蛋白質(zhì).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、采用多維色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析鑒定小鼠肝臟質(zhì)膜蛋白質(zhì).以強(qiáng)陽離子交換柱(5mm×320μm)為第一相,反相柱(150mm ×75μm)為第二相,在兩相之間通過六通閥連接一預(yù)柱(5mm×300μm)用來脫鹽和濃縮肽段.用密度梯度超速離心方法獲得的小鼠肝臟細(xì)胞質(zhì)膜樣品經(jīng)酶解并適當(dāng)酸化后通過離子交換柱吸附,然后分別用10個不同的鹽濃度進(jìn)行洗脫.洗脫物經(jīng)預(yù)柱脫鹽和濃縮后進(jìn)入毛細(xì)管反相柱進(jìn)行反相分離,分離后的肽段直接進(jìn)入質(zhì)譜儀離子源進(jìn)行一級和

2、二級質(zhì)譜的分析.質(zhì)譜儀采得的數(shù)據(jù)經(jīng)計算機(jī)處理后用Mascot軟件進(jìn)行庫搜尋鑒定.通過這種方法,從小鼠肝組織質(zhì)膜蛋白提取物中一共鑒定出126種蛋白質(zhì),其中43種為膜蛋白或與膜相關(guān)的蛋白質(zhì),包括用2DE方法所未曾鑒定的具有多跨膜區(qū)的部分膜蛋白質(zhì).該研究為建立質(zhì)膜蛋白質(zhì)組學(xué)研究的多維色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)提供了有價值的基礎(chǔ)性研究資料.我們還首次對大鼠海馬組織質(zhì)膜蛋白質(zhì)組進(jìn)行了研究.通過密度梯度超速離心的方法獲得質(zhì)膜蛋白質(zhì)后,采取一維聚丙烯酰胺凝膠

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