沉默HIF-1α對人涎腺腺樣囊性癌SACC-83細(xì)胞生長、侵襲及血管形成的影響.pdf

1、目的：
　　探討人涎腺腺樣囊性癌SACC-83細(xì)胞在常氧和低氧環(huán)境中缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1α表達(dá)及細(xì)胞生物學(xué)行為的變化，沉默HIF-1α對低氧環(huán)境中的SACC-83細(xì)胞生長、遷移和侵襲能力的影響及對血管生成的影響和機制。
　　方法：
　　1、shRNA-HIF-1α質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SACC-83細(xì)胞，經(jīng)G418篩選和挑取陽性集落細(xì)胞擴增培養(yǎng)，Western blot鑒定沉默效率。
　　2、Western blot、雙抗體

2、夾心ELISA法檢測SACC-83細(xì)胞在常氧（21％O2）和低氧（5%O2）環(huán)境中HIF-1α、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表達(dá)水平的差異及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的分泌情況；沉默HIF-1α對低氧（5%O2）環(huán)境中SACC-83細(xì)胞MMP-2蛋白表達(dá)及VEGF分泌的影響。
　　3、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）體外三維培養(yǎng)法分析常氧（21%O2）和低氧（5%O2）環(huán)境中培養(yǎng)的SACC-83細(xì)胞分泌物促血管形成能力的差

3、別以及沉默HIF-1α對低氧（5%O2）環(huán)境中SACC-83細(xì)胞分泌物促血管形成能力的影響。
　　4、細(xì)胞劃痕實驗、Transwell侵襲實驗觀察SACC-83細(xì)胞在常氧（21%O2）和低氧（5%O2）環(huán)境中的遷移、侵襲能力以及沉默HIF-1α對低氧（5%O2）環(huán)境中SACC-83細(xì)胞的遷移、侵襲能力的影響。
　　5、MTT比色法、流式細(xì)胞分析法檢測SACC-83細(xì)胞在常氧（21%O2）和低氧（5%O2）環(huán)境中增殖、凋亡和細(xì)

4、胞周期的變化情況以及沉默HIF-1α對低氧（5%O2）環(huán)境中SACC-83細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期的影響。
　　結(jié)果：
　　1、成功構(gòu)建HIF-1α低表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞株（SACC-83/shHIF-1α）。
　　2、Western blot和ELISA結(jié)果顯示，SACC-83細(xì)胞在低氧環(huán)境下HIF-1α、MMP-2蛋白表達(dá)水平及培養(yǎng)上清VEGF分泌明顯增加（P＜0.01），促血管形成能力提高（P＜0.05），細(xì)胞遷移（P

5、＜0.01）和侵襲能力（P＜0.05）更強，但細(xì)胞增殖、凋亡和周期分布的變化沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　3、在低氧環(huán)境中，SACC-83/shHIF-1α細(xì)胞MMP-2蛋白、培養(yǎng)上清中VEGF蛋白含量均降低（P＜0.01），促血管形成能力明顯下降（P＜0.01），細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力顯著變?nèi)酰≒＜0.01），凋亡細(xì)胞比例增高（P＜0.05），但細(xì)胞周期分布無明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　低氧