青藤堿對(duì)IgA腎病大鼠蛋白尿及足細(xì)胞損傷的影響.pdf

1、目的:
　　 觀(guān)察青藤堿對(duì)IgA腎病大鼠的治療作用及對(duì)足細(xì)胞損傷的影響，并探討其可能的機(jī)制。
　　 方法:
　　 1將SPF級(jí)雄性SD大鼠60只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)取10只作為正常對(duì)照組，將其余50只大鼠隨機(jī)分為模型組10只，對(duì)照組10只，青藤堿低、中、高劑量組各10只，每只大鼠以牛血清白蛋白(BSA)(400mg/kg)隔日以40mg/ml灌胃8周，皮下注射四氯化碳0.1ml+蓖麻油0.5ml持續(xù)8周，于第

2、6周時(shí)給予0.025％脂多糖0.05mg(0.2ml)尾靜脈注射，連續(xù)3周。
　　 2青藤堿低劑量組(30mg/kg)、青藤堿中劑量組(60mg/kg)、高劑量組(120mg/kg)大鼠分別灌胃給予3mg/ml、6mg/ml、12mg/ml青藤堿混懸液10ml/kg;陽(yáng)性對(duì)照組(20mg/kg)大鼠灌胃給予纈沙坦10ml/kg;模型組與正常組灌胃給予等體積生理鹽水。于第9周開(kāi)始干預(yù)治療，每天1次，療程為5周。
　　 3記

3、錄各組大鼠一般情況。收集第6、8、13周24小時(shí)尿液測(cè)24h尿蛋白定量(24hupq)及尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù);第8、13周末次給藥24小時(shí)后取血測(cè)血肌酐，尿素氮;13周末取腎組織光鏡下觀(guān)察組織病理變化;免疫熒光檢測(cè)腎小球IgA沉積強(qiáng)度;電鏡下檢測(cè)腎小球超微結(jié)構(gòu)變化;免疫組化檢測(cè)Nephrin和α-actinin-4蛋白;免疫熒光檢測(cè) Nephrin和α-actinin-4蛋白;RT-PCR檢測(cè) Nephrin和α-actinin-4 mRNA。

4、
　　 4全部數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多個(gè)樣本比較用單因素方差分析;組間比較分析采用LSD法。
　　 結(jié)果:
　　 1一般情況:各治療組大鼠毛色、飲食進(jìn)水及活動(dòng)度較模型組改善。
　　 2尿液檢測(cè):模型組、纈沙坦組、青藤堿各劑量組在造模后第6、8周24hupq、尿紅細(xì)胞均明顯高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。第13周末，與正常組比較，模型組24h

5、upq、尿紅細(xì)胞明顯升高(P＜0.01);與模型組比較，各藥物治療組24hupq、尿紅細(xì)胞明顯減少(P＜0.01);與纈沙坦組比較，青藤堿各劑量組24hupq無(wú)顯著差異(P＞0.05)，青藤堿各劑量組尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)有顯著差異(P＜0.01)，且青藤堿高劑量組優(yōu)于青藤堿中、低劑量組(P＜0.01)。
　　 3血液檢測(cè):第8、13周各組大鼠血肌酐與尿素氮無(wú)顯著差異，(P＞0.05)。
　　 4 Nephrin和α-actini

6、n-4檢測(cè):Nephrin和α-actinin-4免疫組化及免疫熒光平均光密度(IOD)顯示，與正常組比較，模型組Nephrin和α-actinin-4平均光密度表達(dá)明顯減少(P＜0.01);與模型組比較，各藥物治療組Nephrin和α-actinin-4的平均光密度表達(dá)明顯升高(P＜0.01);與纈沙坦組比較，青藤堿高劑量組Nephrin平均光密度表達(dá)有明顯差異(P＜0.01)，且青藤堿高劑量組Nephrin平均光密度表達(dá)高于青藤堿中

7、、低劑量組(P＜0.01)，青藤堿各劑量組α-actinin-4平均光密度表達(dá)無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　 5 RT-PCR檢測(cè):與正常組比較，模型組Nephrin mRNA和α-actinin-4 mRNA表達(dá)明顯減少(P＜0.01);與模型組比較，各藥物治療組NephrinmRNA和α-actinin-4mRNA表達(dá)明顯升高(P＜0.01);與纈沙坦組比較，青藤堿各劑量組Nephrin mRNA和α-actinin-4

8、mRNA表達(dá)無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　 6腎臟病理:
　　 (1)光鏡:PAS染色顯示，與正常組比較，模型組大鼠系膜基質(zhì)增多，各治療組系膜基質(zhì)較模型組不同程度改善。
　　 (2)免疫熒光:模型組大鼠IgA呈團(tuán)塊狀沉積于系膜區(qū)，各治療組IgA熒光強(qiáng)度均較模型組不同程度的減弱。
　　 (3)電鏡:正常組大鼠基底膜均勻，足突清晰可見(jiàn)，基質(zhì)均勻;模型組可見(jiàn)系膜基質(zhì)明顯增生，系膜區(qū)電子致密物沉積，可見(jiàn)細(xì)胞凋

9、亡，足突廣泛融合;各治療組部分足突融合及少量電子致密物沉積。
　　 結(jié)論:
　　 本研究結(jié)果顯示:青藤堿能夠降低24小時(shí)尿蛋白定量，減少尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，改善腎臟病理變化，保護(hù)腎小球足細(xì)胞;提示其機(jī)制可能是青藤堿通過(guò)調(diào)節(jié)Nephrin mRNA和α-actinin-4 mRNA的表達(dá)，提高Nephrin和α-actinin-4蛋白的表達(dá)等多種途徑，減輕腎小球足細(xì)胞損傷，改善IgA腎病腎臟病理，減少I(mǎi)gA腎病大鼠的尿蛋白及尿紅