利用馬血制備氯化血紅素技術的研究.pdf

1、馬血血紅蛋白中含有豐富的血紅素,血紅素是一種重要的含鐵卟啉配合物,是一種無毒副作用的生物態(tài)補鐵劑。當血紅素脫離珠蛋白后,迅速被氧化為高鐵血紅素,所以利用馬血制備的的血紅素一般為氯化高鐵血紅素。本試驗以新疆馬的抗凝血為實驗材料,對氯化血紅素四個制備階段:紅細胞破胞、血紅素與珠蛋白拆分、氯化血紅素提取分離及氯化血紅素的純化的工藝條件進行了優(yōu)化。研究結(jié)果如下:
　　(1)以氯化血紅素得率為指標,研究了超聲波破胞功率、破胞劑比例、破胞時間

2、對紅細胞破胞效果的影響,并與混合試劑破胞法進行比較。通過正交試驗可以得出超聲波破胞法的最佳工藝條件:超聲波破胞功率0.8kW、破胞劑(水:乙醇)比例15:1、破胞處理6min。
　　(2)以珠蛋白與血紅素的拆分率為檢測指標,在單因素試驗的基礎上,采用Box-behnken響應曲面設計,研究了pH值、丙酮添加量、處理時間對珠蛋白與血紅素拆分率的影響,得到工藝條件模型,確定最佳的工藝條件:丙酮添加量是紅細胞體積的5.25倍、pH值2.

3、86,處理3.38h,實際拆分率為95.83％,與模型的預測數(shù)據(jù)基本相符。
　　(3)以氯化血紅素的純度及得率作為檢測指標,通過正交試驗得出用 CMC-Na法提取氯化血紅素的最佳工藝條件:CMC-Na添加量為0.45g、pH值6.0,提取8h,氯化血紅素純度及得率分別為29.42%和56.08%;用乙酸鈉法提取氯化血紅素的最佳工藝條件:乙酸鈉添加量為氯化血紅素丙酮抽提液體積的2.0%,pH值4.8,提取15h,氯化血紅素純度及得率

4、分別為36.30%和44.88%。CMC-Na法提取氯化血紅素的優(yōu)勢在于血紅素和羧甲基纖維素鈉絡合物可直接作為抗貧血藥的壓片原料,而乙酸鈉法提取氯化血紅素的優(yōu)勢在于所得粗品氯化血紅素純度較高,后期純化簡單,總體制備成本較低。
　　(4)以氯化血紅素的純度為檢測指標,采用酸堿法分離純化血紅素,研究了氨水濃度、料液比、酸化處理時間對氯化血紅素純度的影響,選用高效液相色譜對純化的血紅素進行鑒定。通過正交試驗得出最佳工藝條件:氨水濃度為1