改良型人NK細(xì)胞體外擴(kuò)增技術(shù)建立及CAR-NK細(xì)胞治療技術(shù)初步研究.pdf

1、NK細(xì)胞過繼療法是腫瘤免疫療法的一種具有前景的治療策略，然而，大量擴(kuò)增具有功能的NK細(xì)胞方法的缺乏限制了它的發(fā)展。由于IL21分子是NK細(xì)胞功能的重要調(diào)節(jié)分子，因此本文的主要目的之一是建立一種改良型的基于IL21分子的NK細(xì)胞體外擴(kuò)增技術(shù)。在本文中，我們在穩(wěn)定表達(dá)IL15和CD137L分子的pAPC細(xì)胞上再進(jìn)一步表達(dá) IL21分子，然后用構(gòu)建的該工程細(xì)胞株（命名為pAPCNK）來擴(kuò)增NK細(xì)胞。具體方法為：分離4名健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞（

2、Peripheral blood mononuclear cell，PBMC），采用工程細(xì)胞pAPCNK并補(bǔ)充細(xì)胞因子IL2對NK細(xì)胞進(jìn)行體外擴(kuò)增，應(yīng)用細(xì)胞計(jì)數(shù)法和流式細(xì)胞術(shù)分別比較NK細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)和NK細(xì)胞純度，并采用CFSE/7-AAD法對腫瘤細(xì)胞K562和RPMI-8226進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)檢測殺傷效率。經(jīng)過三周的刺激培養(yǎng)，NK細(xì)胞平均擴(kuò)增至409.4倍，細(xì)胞純度由最初的低于20％提高到90%以上。殺傷實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，擴(kuò)增的NK細(xì)胞

3、對K562細(xì)胞殺傷率高達(dá)85.2%。
　　但由于 NK細(xì)胞非抗原特異性的殺傷特征，會(huì)限制其臨床上的治療效果。近年來過繼性細(xì)胞治療技術(shù)中，嵌合抗原受體（chimeric antigen receptor，CAR）修飾的T細(xì)胞技術(shù)異軍突起，在體外和臨床試驗(yàn)中表現(xiàn)出良好的靶向性、殺傷性和持久性，展示了巨大的應(yīng)用潛力和發(fā)展前景。因此本研究在NK細(xì)胞擴(kuò)增技術(shù)體系建立的基礎(chǔ)上，嘗試開發(fā)CAR-NK細(xì)胞治療技術(shù)，從而提高NK細(xì)胞活性并且讓 NK