兩種海洋生物抗炎活性成分研究.pdf

1、目的：為篩選出具有高效低毒、臨床應(yīng)用前景的先導(dǎo)化合物，本文對采自中國南海海洋生物軟珊瑚Sinularia flexibilis和海綿Axinellasp.的化學(xué)成分及其抗炎生物活性進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。
　　方法：將采集的軟珊瑚Sinularia flexibilis進(jìn)行甲醇提取，海綿Axinellasp.進(jìn)行乙醇提取后，對軟珊瑚的二氯甲烷層萃取物和海綿的正丁醇萃取物進(jìn)行分離、純化和結(jié)構(gòu)解析。綜合利用半制備HPLC，減壓柱色譜,常壓柱

2、色譜，凝膠柱色譜,制備薄層色譜等分離純化方法，從軟珊瑚Sinularia flexibilis樣品和海綿Axinella sp.樣品中獲得單體化合物。利用理化性質(zhì)，并結(jié)合質(zhì)譜(MS)、核磁共振波譜(1H NMR、13C NMR、2D NMR)等現(xiàn)代波譜技術(shù)，參考相關(guān)文獻(xiàn)，確定化合物的平面結(jié)構(gòu)和立體構(gòu)型。對分離得到的單體化合物，在巨噬細(xì)胞(RAW264.7)水平采用MTT法對抗炎活性進(jìn)行了初步評價。在非細(xì)胞毒劑量下，利用Griess法檢測

3、各單體化合物對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞釋放NO的抑制活性。用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA），測定 LPS誘導(dǎo)下，部分化合物對抑制 RAW264.7巨噬細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的水平的影響。
　　結(jié)果：從軟珊瑚Sinularia flexibilis樣品中分離得到11個單體化合物，海綿Axinella sp.樣品獲得9個單體化合物,分別命名和鑒定為：sinulaflexiolide M(1), sinulaf

4、lexiolide N(2),sinulaflexiolide O(3),sinulaflexiolide P(4),sinulaflexiolide Q(5),sinulaflexiolide R(6), sinulaflexiolide I(7),sinulaflexiolideL(8),(-)14-deoxycrassin(9), dihydrosinularin(10),24-亞甲基膽甾醇(11), dibromophakell

5、in(12), monobromophakellin(13),debromohymenialdisine(14), hymenialdisine(15),aldisin(16),3-bromoaldisin(17),尼克酰胺(18),胸腺嘧啶(19)及尿嘧啶(20)。經(jīng)確認(rèn)，化合物1-6為未見文獻(xiàn)報道的新化合物，化合物1-10為西松烷型二萜類化合物，化合物12-17為吡咯生物堿類化合物。且化合物18-20首次從海綿Axinella sp

6、.中分離得到。
　　在非細(xì)胞毒劑量下，利用 Griess法檢測各單體化合物對 LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞釋放NO的抑制活性，結(jié)果顯示化合物1、2、3、4、7、8、10、12、14、15、19對NO的生成有一定的抑制作用，在10μM濃度下，抑制率分別為18.4％、14.46%、18.40%、13.14%、15.77%、14.66%、55.6%、10.84%、11.21%、13.46%、9.52%。采用 ELISA法，測定在 L

7、PS誘導(dǎo)下，部分單體對RAW264.7細(xì)胞分泌 TNF-α抑制水平的影響，檢測結(jié)果為化合物12、14對RAW264.7細(xì)胞分泌TNF-α有較弱的抑制活性，在10μM濃度下，抑制率分別為5.08%和0.70%。
　　結(jié)論：該研究在一定程度上發(fā)展并豐富了中國南海軟珊瑚Sinularia flexibilis和海綿Axinella sp.的生物多樣性和化學(xué)多樣性，也為化學(xué)分類學(xué)提供了化合物基礎(chǔ)，補(bǔ)充了我國南海軟珊瑚和海綿代謝產(chǎn)物的研究內(nèi)