非編碼RNA調(diào)控食管癌轉(zhuǎn)移的功能機(jī)制研究.pdf

1、我國(guó)食管癌發(fā)病率和死亡率均居世界首位。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)在2014年2月3日發(fā)表的《世界癌癥報(bào)告2014》，2012年食管癌新發(fā)病例達(dá)45.6萬(wàn)例，病理分型主要為鱗癌。臨床上因?qū)κ彻馨┌l(fā)生和發(fā)展機(jī)制尚不明了，始終缺乏有效的早診、特異性分子靶點(diǎn)和治療藥物。因此，對(duì)食管癌的防治已上升到國(guó)家層面的健康戰(zhàn)略需求。核仁小RNA是一類(lèi)在真核細(xì)胞中廣泛存在的長(zhǎng)度約為60～300nt的非編碼RNA，主要由內(nèi)含子編碼，能與特定的蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物

2、在細(xì)胞中穩(wěn)定存在。它們可以指導(dǎo)rRNA的2'-O甲基化及假尿嘧啶化修飾，影響rRNA的成熟，從而影響蛋白質(zhì)的合成。研究發(fā)現(xiàn)snoRNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用，但在食管癌的研究中還未見(jiàn)有關(guān)snoRNA的報(bào)道。
　　在本文的第一部分研究中，首先對(duì)食管鱗癌早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與非轉(zhuǎn)移標(biāo)本進(jìn)行miRNA芯片分析并驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)snord75在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中高表達(dá)。在細(xì)胞水平檢測(cè)snord75對(duì)食管鱗癌細(xì)胞表型的影響，結(jié)果顯示snord

3、75促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞惡性表型的形成。我們?cè)诼闶篌w內(nèi)發(fā)現(xiàn)snord75高表達(dá)促進(jìn)其成瘤能力。進(jìn)一步探究snord75的功能機(jī)制，通過(guò)Biotin-RNA pull down、質(zhì)譜鑒定并用westernblot、RIP實(shí)驗(yàn)等進(jìn)一步驗(yàn)證，找到了一個(gè)與其特異性結(jié)合的蛋白ILF3，ILF3是VEGFC的轉(zhuǎn)錄因子，snord75與ILF3結(jié)合可以促進(jìn)VEGFC的轉(zhuǎn)錄，從而促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。在臨床水平，snord75在75對(duì)食管鱗癌組織、122例食管鱗

4、癌患者血漿中呈現(xiàn)高表達(dá)，相對(duì)于75例配對(duì)的癌旁組織、55例正常人的血漿中的表達(dá);且snord75表達(dá)越高，病人的生存預(yù)后越差。因此，snord75在食管癌中與ILF3蛋白結(jié)合，促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，呈現(xiàn)癌基因的特點(diǎn)。
　　miRNA是一類(lèi)長(zhǎng)度為19～25個(gè)核苷酸的單鏈非編碼RNA，廣泛存在于真核生物中。miRNA通過(guò)與靶基因3'UTR結(jié)合，促進(jìn)靶mRNA的降解或抑制其翻譯，從而調(diào)控其表達(dá)，影響細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等過(guò)程。近年來(lái)研究顯示

5、，miRNA與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，發(fā)揮類(lèi)似癌基因或抑癌基因的功能。
　　在本文第二部分研究中，發(fā)現(xiàn)miR-425高表達(dá)促進(jìn)食管癌細(xì)胞增殖、克隆形成及侵襲遷移能力。通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)SMAD2是miR-425的靶基因，且miR-425與SMAD2第二個(gè)結(jié)合位點(diǎn)(7649-7654)結(jié)合，影響其mRNA和蛋白水平的表達(dá)。高表達(dá)miR-425，E-cadherin表達(dá)降低，而Vimentin表達(dá)升高，靶基因SMAD2的表