Visfatin對(duì)肝臟糖脂代謝影響的研究.pdf

1、目的：①選擇2型糖尿病(T2DM)、T2DM合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者及體檢正常人群為研究對(duì)象，觀察不同人群空腹血漿visfatin水平變化，初步探討visfatin與T2DM合并NAFLD的關(guān)系，為臨床診治NAFLD提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。②體外培養(yǎng)正常人肝細(xì)胞HL-7702細(xì)胞系；觀察visfatin對(duì)HL-7702細(xì)胞系增殖的影響；研究visfatin影響正常人肝細(xì)胞的作用機(jī)制，為visfatin有效的降低血糖、減輕

2、胰島素抵抗、改善NAFLD等臨床治療提供初步的理論依據(jù).
　　 方法：⑴采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)了T2DM合并NAFLD組(A組)、T2DM不合并NAFLD組(B組)以及正常對(duì)照組的血漿visfatin水平，同時(shí)測(cè)定各組的血糖、血脂、糖化血紅蛋白、胰島素等生化指標(biāo)，計(jì)算腰臀比(WHR)、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)，分析各組visfatin與其他檢測(cè)指標(biāo)的關(guān)系；⑵體外培養(yǎng)正常人肝細(xì)胞

3、，通過(guò)倒置顯微鏡形態(tài)學(xué)觀察。⑶將培養(yǎng)的正常人肝細(xì)胞隨機(jī)分為5組：對(duì)照組，visfatin(50ng/mL)組，visfatin(100ng/mL)組，visfatin(250ng/mL)N，visfatin(500ng/mL)組，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，分別干預(yù)24、48小時(shí)(h)。觀察各組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，并用MTT法檢測(cè)不同濃度的visfatin干預(yù)48小時(shí)對(duì)細(xì)胞存活數(shù)量和活力的影響，分析不同濃度的visfatin對(duì)肝細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。⑷將培

4、養(yǎng)的肝細(xì)胞隨機(jī)分為5組：對(duì)照組，visfatin(50ng/mL)組，visfatin(100ng/mL)組，visfatin(250ng/mL)組，visfatin(500ng/mL)組，分別干預(yù)1h、6h、12h、24h、48h。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定各組細(xì)胞裂解液中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)、磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶(PEPCK)、乙酰輔酶A羧化酶(ACC)的蛋白表達(dá)情況。<

5、br>　　 結(jié)果：①A組與B組比較，收縮壓、體重、腰圍、BMI、WHR、TC、TG、LDL、HDL、HbA1c差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，但均高于正常對(duì)照組(均P<0.01)；A組的FBG、餐后2小時(shí)血糖(P2hBG)、FIns、HOMA-IR、visfatin差異均顯著高于B組(P<0.01)。②直線相關(guān)分析顯示，120例T2DM患者的血漿visfatin水平與HOMA-IR、Fins、FBG、P2hBG、BMI、LDL呈

6、正相關(guān)(r分別為0.886、0.708、0.706、0.492、0.234、0.213，P<0.05)；與HDL呈負(fù)相關(guān)(r為-0.206)；與HbA1c、TG、TC、體重、WHR、SBP、DBP無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。Logistic回歸分析表明visfatin、FBG是影響T2DM患者是否發(fā)生NAFLD的影響因素。由ROC曲線得到的visfatin預(yù)測(cè)NAFLD的臨界值(cut off值)5.175ng/ml，靈敏度為98.2％，

7、特異度為39.1％，OR值為36.84。③正常人肝細(xì)胞HL-7702的傳代培養(yǎng)情況良好。MTT結(jié)果表明：不同visfatin濃度干預(yù)HL-7702細(xì)胞系，在24h、48h時(shí)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)均無(wú)明顯影響。④ELISA結(jié)果：visfatin的干預(yù)對(duì)PI3K、pAMPK、PEPCK的影響呈現(xiàn)濃度依賴性，PI3K、pAMPK的表達(dá)隨著visfaith干預(yù)濃度的增加而增加，PEPCK的表達(dá)隨著visfatin濃度的增加而降低；ACC的表達(dá)量隨著vis

8、fatin干預(yù)濃度的變化表現(xiàn)出波動(dòng)性變化，較高濃度濃度的visfatin對(duì)ACC表達(dá)無(wú)影響，而較低濃度的visfatin刺激ACC的表達(dá)；時(shí)間變化趨勢(shì)：PI3K、pAMPK表達(dá)的時(shí)間變化趨勢(shì)較為一致，在干預(yù)1h達(dá)到第一個(gè)高峰，隨后下降，從6h到12h又呈現(xiàn)緩慢上升趨勢(shì)，12h至24h升高明顯，達(dá)第二個(gè)高峰，隨后又逐漸下降。PEPCK的表達(dá)則與PI3K、pAMPK的表達(dá)相反，并且干預(yù)各時(shí)間點(diǎn)PEPCK的表達(dá)均較對(duì)照明顯降低。ACC的表達(dá)因

9、干預(yù)濃度的不同表現(xiàn)出不同的變化趨勢(shì)，50ng/ml visfatin干預(yù)組、100ng/mlvisfatin干預(yù)組在各時(shí)間點(diǎn)都是促進(jìn)ACC表達(dá)的，250ng/ml visfatin干預(yù)組、500ng/ml visfatin干預(yù)組隨著時(shí)間的變化以對(duì)照組為基線上下波動(dòng)。
　　 結(jié)論：⑴通過(guò)整體水平的研究，發(fā)現(xiàn)單純T2DM患者和T2DM合并NAFLD患者的血漿visfatin濃度較正常人群明顯升高，visfatin與HOMA-IR正相