原生質(zhì)體融合技術(shù)構(gòu)建直接利用淀粉生產(chǎn)衣康酸菌株.pdf_第1頁
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1、選擇衣康酸高產(chǎn)菌株棲土曲霉Aspergillus terreus T-730和檸檬酸高產(chǎn)菌株黑曲霉Aspergillus niger Ni-5,以抗霉素A對黑曲霉Ni-5進行誘導(dǎo)培育,形成遺傳穩(wěn)定的抗藥性菌株Ni-5k.用UV對黑曲霉Ni-5k原生質(zhì)體進行滅活處理,滅活條件為:紫外線燈功率20W,燈距40cm,滅活時間35分鐘,以T-730、Ni-5k菌株為親本,采用混合酶液處理兩親本菌株的營養(yǎng)菌絲,獲得原生質(zhì)體.T-730菌株原生質(zhì)體

2、制備最佳條件是:菌齡14小時、酶濃度1.2﹪、酶解溫度32℃、酶濃度1.0﹪、酶解溫度25℃、酶解時間4小時.以30﹪PEG6000為助融劑,30℃保溫20分鐘,進行原生質(zhì)體融合,融合頻率為1.18×10<'-5>.獲得87株異核體.連續(xù)傳代證明其中3個事例株(F3,F9,F11)是穩(wěn)定的,沒有發(fā)生雙親類型的分離.經(jīng)搖瓶液體培養(yǎng)顯示,F3具有較高的直接利用淀粉產(chǎn)衣康酸功能.對F3的發(fā)酵性能測定表明,F3在發(fā)酵過程中積累葡萄糖淀粉酶和衣康

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