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1、基于納米孔的第三代基因測(cè)序儀以及相關(guān)的關(guān)鍵技術(shù)對(duì)于保護(hù)我國(guó)自己的基因資源具有戰(zhàn)略意義。要實(shí)現(xiàn)該類(lèi)基因測(cè)序技術(shù),目前存在的主要問(wèn)題:一是 DNA分子過(guò)孔速度過(guò)快,由于過(guò)孔速度過(guò)快,通過(guò)測(cè)試得到的過(guò)孔電流的特征來(lái)識(shí)別過(guò)孔的堿基還具有較大困難;二是四種堿基與生物納米孔壁相互作用機(jī)理尚不清晰,進(jìn)一步的研究表明,DNA堿基與納米孔孔壁之間的相互作用力越大,那么納流體中離子的熱運(yùn)動(dòng)就越小,而噪聲信號(hào)主要就來(lái)源于離子的熱運(yùn)動(dòng),增加 DNA堿基與納米孔
2、壁之間的相互作用力有助于提高信噪比。因此研究DNA堿基與壁面的特異性作用對(duì)于第三代基因測(cè)序具有重大的意義。
本文對(duì) DNA兩種堿基的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析,從機(jī)械特性出發(fā),研究了單晶硅的納米力學(xué)性能,并以單晶硅為基體材料,實(shí)現(xiàn)DNA堿基生物分子的組裝,系統(tǒng)的研究修飾機(jī)理、固定率的影響因素以及受限條件下修飾表面的力學(xué)行為。
表征結(jié)果表明,腺嘌呤分子A和胸腺嘧啶分子T均有區(qū)別于其他堿基的特征性譜峰。接觸角測(cè)量結(jié)果顯示,硅基體完全
3、硅烷化的時(shí)間為30min左右;醛基化反應(yīng)在20min時(shí)初次形成完整的分子膜,并隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐層生長(zhǎng)。DNA堿基鏈的活性氨基基團(tuán)與硅基體表面的醛基基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)從而固定在硅基體上。
熒光試驗(yàn)結(jié)果表明,影響熒光背景強(qiáng)度的四個(gè)因素中,硅烷化試劑的濃度影響最大,硅烷化時(shí)間影響最小。當(dāng)硅烷化和醛基化試劑濃度較低時(shí),堿基A和堿基T的固定率隨著時(shí)間的增加均呈現(xiàn)線(xiàn)性增長(zhǎng);當(dāng)試劑濃度較大時(shí),堿基A和堿基T的固定率均出現(xiàn)極大值。當(dāng)探針的緩沖溶液pH
4、為弱堿性時(shí),堿基固定率較大;探針點(diǎn)樣濃度為50μmol/L時(shí)固定率較高;在同一條件下堿基 A固定率高于堿基T。
單晶硅的納米力學(xué)研究結(jié)果表明:對(duì)于既定的最大加載力,隨著壓頭尖端半錐角的增大,單晶硅彈性回復(fù)率逐漸增大,而彈性回復(fù)量基本恒定;在同一實(shí)驗(yàn)條件下,相較于(100)晶面,單晶硅(111)晶面具有較小的硬度和彈性模量值;隨著最大加載力的增加,單晶硅壓痕周?chē)牧蠒?huì)出現(xiàn)堆積和表面隆起現(xiàn)象,壓痕的彈性回復(fù)量增大,塑性區(qū)的范圍隨著
5、加載力的增大而增大,出現(xiàn)明顯的尺寸效應(yīng)。
修飾面的力學(xué)行為研究結(jié)果表明:在大氣環(huán)境下,對(duì)于10nm以上的間隙,探針與硅片表面法向作用力受表面化學(xué)形態(tài)影響較??;在7nm以下間隙,經(jīng)堿基修飾后的表面與探針作用力明顯減小,且探針與堿基A和堿基T的作用力受加載速率的影響較大。隨著法向力的增加,探針與硅基體的橫向作用力增加,摩擦系數(shù)逐漸減小;探針與不同修飾條件下硅片表面產(chǎn)生了不同的相互作用力。此外,與堿基T相比,由堿基A修飾后表面所產(chǎn)生
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