牡丹育種技術(shù)及雜交一代遺傳多樣性的研究.pdf

1、牡丹(Paeonia suffruticosa)為落葉灌木，最早作藥用，在我國(guó)已有2000多年的栽培歷史，是我國(guó)十大名花之一。本研究主要通過雜交育種、輻射育種兩種方法，以期培育出符合某種特殊需要的牡丹新品種;并以混合授粉方式產(chǎn)生的32份牡丹雜交一代為材料，5個(gè)父本品種為對(duì)照，利用SRAP分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行雜交一代間遺傳多樣性及子代與親本間遺傳關(guān)系的研究，為今后牡丹選種、育種工作提供科學(xué)依據(jù)。
　　 主要研究結(jié)論如下:
　　

2、 1.采用人工授粉法，根據(jù)特定的育種目標(biāo)設(shè)定雜交組合，共雜交了75個(gè)組合，結(jié)實(shí)率達(dá)到70％以上。
　　 2.輻射育種對(duì)牡丹種子發(fā)芽率、出苗率、苗高及根長(zhǎng)的影響
　　 2.1不同劑量的60Co-γ輻射牡丹種子，對(duì)種子發(fā)芽率、出苗率有不同程度的影響。17.46Gy輻射處理發(fā)芽率最高，17.46-43.65Gy輻射處理與對(duì)照相比發(fā)芽率沒有明顯變化，43.65Gy以上則發(fā)芽率降低;17.46Gy輻射處理出苗率最高，與CK相比差異

3、顯著。不同劑量60Co-γ輻射處理出苗率均高于CK，這表明在一定劑量范圍，60Co-γ射線輻射牡丹種子可促進(jìn)出苗。
　　 2.260Co-γ輻射牡丹種子后，苗高比CK均有不同程度的增加;17.46Gy輻射處理的苗高與CK差異顯著。表明60Co-γ輻射對(duì)牡丹幼苗生長(zhǎng)具有明顯促進(jìn)作用。
　　 2.3不同劑量60Co-γ輻射處理根長(zhǎng)均高于對(duì)照，但差異不顯著。
　　 3.牡丹雜交一代遺傳多樣性的SRAP分析
　　

4、 3.1在正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)上得到了牡丹雜交一代最適的SRAP-PCR反應(yīng)體系，即在25μL反應(yīng)體系中，含有10－PCR Buffer2.5μL，Mg2+2.0 mmol/L，dNTPs0.25 mmol/L，Taq酶1.5 U，引物0.25μmol/L,模板DNA為2.0 ng/μL;其中各因素對(duì)PCR反應(yīng)的影響從大到小依次為:Taq酶、dNTPs、引物、Mg2+、模板;擴(kuò)增程序?yàn)?4℃預(yù)變性5min，94℃變性1min、35℃退火1

5、 min、72℃延伸1min、進(jìn)行5個(gè)循環(huán)，94℃變性1 min、50℃退火1min、72℃延伸1min、進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，72℃延伸10 min，4℃保存。
　　 3.2從100對(duì)引物中篩選出了能穩(wěn)定擴(kuò)增的25對(duì)引物，利用這25對(duì)引物對(duì)試驗(yàn)材料進(jìn)行了擴(kuò)增，共擴(kuò)增出305個(gè)位點(diǎn)，其中300個(gè)為多態(tài)性位點(diǎn)，平均每對(duì)引物擴(kuò)增出12.2個(gè)位點(diǎn)和12個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，多態(tài)性比率達(dá)98.36％;有效等位位點(diǎn)數(shù)在1.9046-1.4354之間，均

6、值為1.6998; Nei's遺傳多樣性指數(shù)(H)在0.4725-0.2759之間，均值為0.3938; Shannon信息指數(shù)(Ⅰ)在0.6649-0.4340之間，均值為0.5743。
　　 3.3供試材料之間的遺傳相似系數(shù)在0.4590～0.7541之間，平均值為0.6287，說明材料間的親緣關(guān)系較近;其中‘Z4’和‘朱砂壘’親緣關(guān)系最遠(yuǎn)，遺傳相似系數(shù)為0.4590，遺傳距離為0.7787;‘Z7’和‘Z9’親緣關(guān)系最近，

7、遺傳相似系數(shù)為0.7541，遺傳距離為0.2822。
　　 3.432份雜交一代的平均Nei's遺傳多樣性指數(shù)H=0.3941、平均Shannon信息指數(shù)I=0.5740，對(duì)照品種的上述兩個(gè)指數(shù)分別為H=0.3114、I=0.4598，顯然雜交一代的這兩項(xiàng)指標(biāo)均高于對(duì)照品種，表明雜交一代的遺傳多樣性更豐富、遺傳背景更復(fù)雜。
　　 3.5根據(jù)SRAP擴(kuò)增結(jié)果，利用UPGMA法構(gòu)建樹狀聚類圖，聚類分析將32份雜交一代分為4類