MiR-204介導蛋白酶活化受體-2(PAR2)誘導腫瘤細胞遷移的研究TTK蛋白激酶的表達與結直腸癌患者預后的關系.pdf

1、結直腸癌(colorectal cancer，CRC)是世界上常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率分別位居第三位和第四位。近年來，外科術式的不斷改進和放化療方案的不斷完善極大程度地改善了結直腸癌的治療效果，但是仍有70％-80％的患者死于結直腸癌的復發(fā)或遠端轉移(Kerr，2003)。結直腸癌的轉移、復發(fā)和耐藥是影響患者預后的重要因素。PAR2是一種具有七次跨膜結構域的G蛋白偶聯(lián)受體，參與炎癥反應、腫瘤的發(fā)生發(fā)展等過程。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)

2、PAR2通過miR-125b調(diào)控其下游靶基因Gab2，從而促進了腫瘤細胞的遷移。本論文在前期研究的基礎上探究(1)miR-204介導PAR2誘導腫瘤細胞遷移的分子機制，(2)酪氨酸和蘇氨酸蛋白激酶(tyrosine and threonine protein kinase，TTK)與結直腸癌患者預后的相關性。
　　筆者發(fā)現(xiàn)PAR2活化后可以負向調(diào)控miR-204的表達，而穩(wěn)定敲降PAR2后miR-204的水平顯著上調(diào)。此外，過表達

3、miR-204可以抑制腫瘤細胞的遷移;反之，敲降miR-204則促進了腫瘤細胞的遷移。重要的是，過表達miR-204可以顯著阻斷PAR2活化誘導的細胞遷移。因此，PAR2活化調(diào)控miR-204的表達，而后者與腫瘤細胞的遷移密切相關。為了鑒定miR-204可能的下游靶基因，首先利用Targetsan、MIRDB等軟件進行預測，然后與已有的PAR2信號相關的轉錄組數(shù)據(jù)進行比對，篩選出可能受miR-204和PAR2共同調(diào)控的四個靶基因MYO1

4、0、ACSL4、USP47、NUAK1，并通過激活或者敲降PAR2、雙熒光素酶報告實驗證實了MYO10和ACSL4是miR-204的直接靶基因，并且與PAR2相關。最終進行細胞功能實驗，發(fā)現(xiàn)miR-204通過其下游靶基因MYO10和ACSL4介導了PAR2誘導的腫瘤細胞遷移。有趣的是，靶基因預測數(shù)據(jù)顯示:PAR2相關的3個miRNAs(miR-204、miR-205和miR-34a)皆可靶向ACSL4的3'UTR區(qū)。但是后續(xù)研究顯示這三

5、個miRNAs對ACSL4的調(diào)控并無顯著的協(xié)同作用。
　　酪氨酸和蘇氨酸蛋白激酶(Tyrosine and Threonine Kinase，TTK)是一類可磷酸化絲氨酸、蘇氨酸以及酪氨酸殘基的雙特異性蛋白激酶，在有絲分裂中心體的復制和染色體的正確分離中具有重要的作用。利用氧化偶氮甲烷(AOM)-葡聚糖硫酸鈉(DSS)建立結腸炎相關的結腸癌模型，結腸組織轉錄組芯片結果提示TTK與CRC發(fā)生相關。本實驗首次驗證TTK的mRNA和蛋白