人源microRNA分子表達庫的構(gòu)建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究表明，細胞內(nèi)不僅存在著mRNA分子，還存在著大量的非編碼RNA分子，它們不編碼蛋白質(zhì)，但參與基因表達的調(diào)控。近年來發(fā)現(xiàn)的miRNA(microRNA)就是其中一種有重要功能的非編碼RNA分子，miRNA廣泛的參與機體生長、發(fā)育和疾病發(fā)生等各種生命過程。雖然在各種生物中已發(fā)現(xiàn)了數(shù)百條miRNA基因，但對它們的功能還知之甚少，為了深入研究miRNA在人類細胞中的作用，構(gòu)建了人源miRNA表達載體的miRNA分子表達庫。

2、方法:依據(jù)Sanger miRBase數(shù)據(jù)庫收錄的miRNA序列設(shè)計引物，從HepG2細胞基因組上擴增含有miRNA前體的目的片段，克隆進真核表達載體，采用Northern blot及雙熒光素酶分析技術(shù)進行表達及功能驗證。 結(jié)果:共構(gòu)建了包括207條人源miRNA表達載體的miRNA分子表達庫，隨機挑選pmiR-16，pmiR-24，pmiR-125a：進行表達驗證，發(fā)現(xiàn)它們都可以在HEK293細胞中表達成熟的miRNA分子，

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