足三針促進結腸術后Cajal細胞修復的NO信號途徑機制研究.pdf

1、外科術后并發(fā)癥主要以胃腸運動功能紊亂最常見，術后往往因胃腸運動無力、胃腸內容物通過障礙而出現(xiàn)腹部脹痛、惡心、嘔吐、排氣排便時間延長等癥狀，其中以胃腸術后表現(xiàn)最為明顯，嚴重影響術后患者的后期恢復。胃腸運動功能紊亂是由圍手術期間多種因素共同影響所致，因其發(fā)病機理未完全明確，臨床上缺乏有效的現(xiàn)代醫(yī)學治療方法，故對術后胃腸運動功能紊亂的防治越來越受到大家的關注以及作為研究的熱點。中醫(yī)具有因人而異、辨證論治等治療特色，在用于術后胃腸功能的調理方面

2、療效明顯，針灸作為中醫(yī)的外治療法，因其沒有藥物對術后胃腸道的刺激，安全性高，越來越受到國內外外科醫(yī)生的青睞。
　　目的:
　　“足三針”是廣州中醫(yī)藥大學靳瑞教授總結和創(chuàng)立的“靳三針”治法中最常用的穴組之一，由足三里、三陰交、太沖三對穴組成，針刺之能疏肝健脾，臨床上運用腹部手術患者能顯著縮短排氣排便時間。本文在此研究基礎上，運用“足三針”針刺結腸吻合術造模成功后的SD大鼠，觀察大鼠首次排便時間，并在針刺的不同時間段取材，觀察各

3、大鼠小腸推進率，檢測結腸組織中的一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合成酶(NOS)活性以及Cajal細胞的c-kit表達情況，與同時間段未進行針刺干預的模型組相比較，以期從NO氣體信號通路途徑探討針刺足三針改善術后大鼠胃腸運動功能的作用機制;同時通過觀察和比較針刺干預時間的長短對大鼠相關指標的影響是否有差異，為臨床上治療該病療程的選擇上提供依據。
　　方法:
　　文獻研究主要歸納總結現(xiàn)代醫(yī)學對術后引起胃腸運動功能紊亂病因、病理的

4、研究和治療方法，以及古現(xiàn)代中醫(yī)對該病病因病機的認識、分析以及主要治療方法。
　　實驗研究主要采取結腸吻合術制造胃腸運動功能紊亂的模型，并按照實驗設計要求隨機分為正常組、模型組、針刺組，后兩組根據干預的時間不同，組內又隨機分為3天模型組、5天模型組、10天模型組和3天針刺組、5天針刺組、10天針刺組，每組各10只，總共7組。針刺每天傍晚進行，并記錄各組手術后的首次排便時間，各組在特定時間段后的第2天，抽取1ml墨水對大鼠進行灌胃，半

5、小時后處死剖腹觀察各組大鼠的小腸推進率，取結腸吻合術口處約1cm長結腸，行NO、NOS、c-kit指標的檢測。
　　結果:
　　1、首次排便觀察結果;針刺組術后首次排便時間短于模型組（P＜0.01）;
　　2、小腸推進率觀察結果:與正常組比較，3天模型組、5天模型組、10天模型組、3天針刺組的小腸推進率均低于正常組(P＜0.01)，5天針刺組、10天針刺組與正常組無差異(P＞0.05);各針刺組之間的比較，3天針刺組低

6、于5天、10天針刺組的小腸推進率(P＜0.01)，5天針刺組與10天針刺組相比無差異（P＞0.05）;各模型組之間比較，3天模型組與5天模型組無差異(P＞0.05)，5天模型組低于10天模型組（P＜0.05):針刺組與模型組相比較，10天模型組與3天針刺組相比無差異(P＞0.05)，而低于5天針刺組(P＜0.01)。
　　3、NO含量的檢測結果:
　　采用硝酸還原酶法檢測各組大鼠結腸組織中NO的含量，與正常組比較，模型組和針

7、刺組的NO含量均高于正常組(P＜0.05);各模型組之間比較，3天模型組NO含量均高于5天、10天模型組（P＜0.05)，5天模型組高于10天模型組（P＜0.01）;各針刺組之間相比較，3天針刺組NO含量均高于5天、10天針刺組（P＜0.01），5天針刺組高于10天針刺組（P＜0.01）;針刺組與模型組之間相比較，3天針刺組與10天模型組NO含量無差異(P＞0.05)，5天針刺組低于10模型組(P＜0.05)。
　　4、NOS酶活

8、性的檢測結果:采用L-精氨酸(L-Arg)法測定一氧化氮合成酶(NOS)酶活性，NOS根據是否需要依賴細胞內鈣離子生理性調節(jié)又可以分為結構型一氧化氮合成酶(cNOS)和誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)。比較各組大鼠NOS(TNOS、iNOS、cNOS)酶活性表達，與正常組相比各組TNOS、iNOS酶活性均高于正常組，cNOS均低于正常組（P＜0.05）;隨著時間的增加，模型組間TNOS、iNOS酶活性比較，3天組高于5天組，5天組高于1

9、0天組（P＜0.05），模型組間cNOS酶活性比較，3天組低于5天組，5天組低于10天組（P＜0.05）;針刺組間TNOS、iNOS酶活性比較，3天組高于5天組，5天組高于10天組(P＜0.05)，針刺組間cNOS酶活性比較，3天組與5天組相比無明顯差異（P＞0.05），5天組低于10天組（P＜0.01）;模型組與針刺組各組間相比較，cNOS、iNOS酶活性3天針刺組與10天模型組無差異(P＞0.05)，TNOS酶活性5天針刺組與10天

10、模型組相比無差異(P＞0.05)。
　　5、各組c-kit表達的平均吸光值比較結果:與正常組比較，3天模型組、5天模型組、10天模型組、3天針刺組均低于正常組(P＜0.01);各模型組之間相比較，3天模型組低于5天模型組，5天模型組低于10天模型組(P＜0.05);各針刺組比較，3天針刺組均低于5天、10天針刺組(P＜0.01)，5天針刺組與10天針刺組相比較無意義(P＞0.05);針刺組與模型組相比較，3天針刺組與10天模型組相

11、比較無差異(P＞0.05)，5天針刺組高于10天模型組(P＜0.05)。
　　結論:
　　1.術后早期介入“足三針”針刺干預可以明顯縮短術后首次排便時間。
　　2.(1)術后針刺可以改善大鼠進食后的小腸推進活動，增強胃腸活動功能;(2)結腸吻合術后模型組大鼠有自愈傾向，隨著時間延長大鼠小腸推進活動增強，但與針刺組相比較，恢復速度較慢，且針刺第五天時小腸推進活動與正常組無明顯差異;
　　3.結腸吻合術可以損傷胃腸起

12、搏Cajal細胞，術后該細胞恢復與其生存微環(huán)境中的NO含量相關，結腸吻合術會造成結腸組織NO含量超載，早期針刺干預能抑制NO的生成，隨著針刺干預時間增加，可逐漸降低結腸吻合口組織中的NO含量;
　　4.NO的生成量與NOS酶活性相關，在手術應激條件下，短時間內會促進iNOS（誘導型一氧化氮合成酶）、抑制cNOS（結構型一氧化氮合成酶）的酶活性表達，針刺可降低iNOS的酶活性，促進cNOS的酶活性表達;隨著針刺時間的延長，TNOS和

13、iNOS酶活性均降低，但針刺組iNOS降低幅度明顯高于相同時間段的模型組，cNOS增長趨勢高于模型組，但針刺第10天時仍未恢復正常;
　　5.c-kit蛋白是Cajal細胞發(fā)育和功能表現(xiàn)的標志，針刺能降低結腸吻合術對Cajal細胞的損傷程度，并能促進c-kit的表達，促進術后Cajal細胞的再生及功能恢復;
　　6.針刺干預結腸吻合術后大鼠可能通過促進起保護作用cNOS的酶活性表達，降低起抑制作用iNOS酶活性的表達，共同調