藻膽體核亞基和藻膽色素的光譜性質及對光合作用功能的研究.pdf

1、擬甲色球藻Chroococcidiopsis thermalis sp.PCC7203是一種能適應遠紅光的藍藻，其全基因組測序于2012年完成。在能適應遠紅光條件的藍藻中，有很多同源的藻膽蛋白亞基，部分亞基共價結合藻膽色素分子，部分非共價結合色素分子。藻膽蛋白亞基通過改變與色素的結合方式以及形成多亞基復合物以適應遠紅光環(huán)境。
　　本研究通過同源比對，找到了擬甲色球藻PCC7203中分別與集胞藻PCC6803中別藻藍蛋白ApcB、A

2、pcD同源的別藻藍蛋白ApcB3(編碼基因Chro_4356和ApcD4(編碼基因Chro_4357)。將apcB3、apcD4分別在有裂合酶CpcS1酶和無酶催化下與藻藍膽素PCB重組，并對ApcD4的可能色素結合位點81位半胱氨酸進行突變，分析細胞、破碎離心上清液、蛋白吸收光譜與熒光光譜的變化。結果表明ApcD4以非共價結合的形式結合藻藍膽素PCB，但兩者結合力比較弱，在鎳離子親和層析過程中藻藍膽素PCB會脫離，只在上清中檢測到熒光

3、。81位半胱氨酸突變后，無法結合藻藍膽素PCB。當ApcD4與ApcB3共同表達在大腸桿菌中時，可結合PCB并可通過鎳離子親和層析提純，并有紅移的熒光峰。為探究ApcD4與ApcB3在藍藻體內的作用機理，構建了分別用apcB3與apcD4替代集胞藻Synechocystissp.PCC6803的基因組中apcB、apcD的質粒，其中在ApcD4的C端帶6個組氨酸標簽。通過提藻總DNA，經PCR檢測，證實apcD4與apcB3都轉化成功。

4、經鎳離子親和層析，沒有得到目的蛋白。
　　將bdfp1.2、bdfp1.3、bdfp1.2:1.2和mcherry通過改變基因的連接順序和基因之間的連接肽(Linker)的長度進行融合，通過測吸收光譜和熒光光譜比較FRET效果。結果顯示mCherry在BDFP1.2的N端時，兩蛋白之間隔12個氨基酸長度的融合蛋白重組BV時，FRET效果最強。為探究藻膽蛋白是否能提高植物光合作用效率，將FRET效果好的融合片段通過農桿菌侵染煙草，在