大鼠出生后小腦發(fā)育過(guò)程中Palmdelphin基因表達(dá)模式研究.pdf

1、小腦作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)中運(yùn)動(dòng)機(jī)能的較高級(jí)調(diào)節(jié)中樞，是研究運(yùn)動(dòng)學(xué)習(xí)記憶的模型。
　　 小腦發(fā)育是一個(gè)包括出生前發(fā)育與出生后發(fā)育的長(zhǎng)時(shí)間過(guò)程，其中出生后的前三個(gè)星期是特定神經(jīng)反射投射形成建立的過(guò)程，更是浦肯野神經(jīng)元軸突與樹(shù)突發(fā)育的重要時(shí)間段。
　　 我們的前期工作中，利用表達(dá)受小腦發(fā)育調(diào)控的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白Mtss1(Metastasis suppressor1，Mtss1)的IMD結(jié)構(gòu)域(IRSp53/MIM homolog

2、y domain，IMD)的pull down結(jié)合質(zhì)譜鑒定尋找Mtss1功能伙伴蛋白質(zhì)時(shí)，篩選到palmdelphin(簡(jiǎn)稱(chēng)PalmD)這一候選蛋白。
　　 根據(jù)已有報(bào)道，PalmD屬于paralemmin家族。該家族的多數(shù)成員位于脂筏，參與質(zhì)膜的動(dòng)態(tài)變化與細(xì)胞形態(tài)的調(diào)控，其中paralemmin1主要定位于神經(jīng)元的軸突、樹(shù)突與樹(shù)突棘。我們鑒定到的候選蛋白PalmD是這個(gè)家族的新成員，定位于細(xì)胞質(zhì)，由于相關(guān)報(bào)道極少，PalmD的

3、功能尚不明確。
　　 為探索PalmD與Mtss1在小腦發(fā)育過(guò)程中是否存在相關(guān)性，我們首先選用原位雜交的方法來(lái)確定PalmD在小腦出生后發(fā)育中的時(shí)空表達(dá)模式。原位雜交是利用帶有特殊標(biāo)記的DNA或RNA探針與組織中或細(xì)胞中的目的核酸片段進(jìn)行雜交，以定性或定量檢測(cè)mRNAs或其他轉(zhuǎn)錄體。我們分別采用出生后0、7、14、21天及56天的大鼠小腦進(jìn)行PalmD的原位雜交檢測(cè)，結(jié)果表明，PalmD在小腦出生后的第7天出現(xiàn)一過(guò)性表達(dá)高峰，其

4、他階段均未能檢測(cè)到PalmD信號(hào)；且細(xì)胞定位模式顯示PalmD的分布集中在浦肯野神經(jīng)元。這些結(jié)果暗示PalmD可能參與小腦出生后神經(jīng)元的形態(tài)發(fā)育過(guò)程相關(guān)。此外，這種時(shí)空定位模式與已有報(bào)道的Mtss1的分布類(lèi)似，為PalmD與Mtss1在小腦出生后浦肯野神經(jīng)元發(fā)育中的相關(guān)性提供支持。
　　 為了進(jìn)一步從定量的角度確認(rèn)PalmD轉(zhuǎn)錄水平與小腦發(fā)育的關(guān)系，我們選用的半定量RT-PCR的方法對(duì)PalmD的表達(dá)水平進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果證實(shí)Pa