瓊玉膏降低順鉑腎毒性的作用及可能機制的研究.pdf

1、背景:順鉑屬細胞周期非特異性藥物，可抑制癌細胞的DNA復制過程，具有廣譜抗腫痛作用，在臨床中常常用于多種實體瘤的化學治療或手術及放射治療后的輔助用藥。但是順鉑毒副作用大，其中腎臟毒性是最常見又嚴重的毒性反應。目前在對抗順鉑腎毒性方面的研究越來越多，但至今沒有一個能解決順鉑腎毒性且不影響其療效的辦法應用于臨床。瓊玉膏是一劑出自宋朝的經典名方，具有滋陰壯水，補脾益氣等功效，主要用于肺虛癆咳，調理腸胃，延緩衰老，涉及到抗炎、抗氧化等藥理作用，

2、已有報道其與順鉑聯(lián)用可緩解順鉑腎毒性。鑒于此，瓊玉膏可能在順鉑引起的腎毒性方面具有一定的治療潛力。
　　目的:本課題主要目的在于通過在體實驗評價瓊玉膏對抗順鉑腎毒性的功效，并探索其初步的作用機制。
　　方法:(1)采用液質聯(lián)用法對瓊玉膏進行質量控制研究，檢測其成分及含量。(2)將C57BL/6雄性小鼠隨機分為空白組（Control）、順鉑組(Cisplatin)、瓊玉膏+順鉑組（QYG+Cisplatin），Control和

3、Cisplatin兩組小鼠用生理鹽水(10ml/kg/day)灌胃10天，QYG+Cisplatin用QYG(14g/kg/day)灌胃10天，在灌胃第7天時，用單劑量順鉑溶液對Cisplatin和QYG+Cisplatin兩組小鼠進行腹腔注射，劑量20 mg/kg。注射順鉑72h后收樣，摘除眼球法取血，收集小鼠兩側腎臟。根據(jù)肌酐、尿素氮檢測試劑盒說明及H&E染色法評價各組小鼠腎臟腎功能。(3)采用電感耦合發(fā)光質譜法和免疫組化法檢測小鼠

4、組織和尿液中pt+含量及Ctr1和OCT2的含量評價各組小鼠對順鉑轉運功能;采用TUNEL染色法和免疫組化法、Western bloting檢測法以及qPCR法檢測小鼠腎組織細胞凋亡和增殖情況以及PCNA和p53的蛋白表達，并且根據(jù)各組小鼠炎癥因子COX-2、IL-1β、TNF-α的mRAN的相對表達量來反應小鼠腎臟組織炎癥反應水平。(4)建立Lewis荷痛小鼠模型，將小鼠隨機分為空白組（Control）、模型組(Model)、順鉑組(

5、Cisplatin)、瓊玉膏組(QYG)和聯(lián)合用藥組(QYG+Cisplatin)。正常組和模型組每日生理鹽水灌胃，每只小鼠每日灌胃10ml/kg，瓊玉膏組每日瓊玉膏灌胃，劑量14g/kg;順鉑組腹腔注射順鉑溶液，劑量2 mg/kg，隔日一次，共3次;順鉑+瓊玉膏組腹腔注射順鉑溶液，劑量2 mg/kg，隔日一次，共3次，同時每日以瓊玉膏灌胃，劑量14g/kg。對荷痛小鼠的腫痛體積進行測量并記錄小鼠死亡情況來評價瓊玉膏對荷痛小鼠腫痛生長情

6、況和存活時間的影響。
　　結果:(1)采用液質聯(lián)用法檢測出瓊玉膏中21種化合物及其分子結構式，并得出其巾13巾化合物的含量;(2)給予順鉑(20 mg/kg)后，小鼠的體重下降，血清尿素氮和肌酐值上升（尿素氮水平從9.87±1.27mmol/L上升至15.34±2.47mmol/L，肌酐水平從16.08±1.05μmol/L上升至31.14±1.81μmol/L)，H&E染色顯示，小鼠的腎臟組織損傷嚴重，并有伴隨大量炎性細胞浸潤。

7、而用瓊玉膏預防用藥的小鼠腎小管及腎小球形態(tài)比較清晰，無可見炎癥細胞浸潤，可以緩解腎臟組織損傷，血清尿素氮和肌酐值顯著低于順鉑組(尿素氮水平為10.28±3.08mmol/L，肌酐水平為21.01±6.08μmol/L);(3)與順鉑組小鼠相比，瓊玉膏可以降低pt+在腎臟的蓄積，下調Ctr1和OCT2的表達量，減少腎小管細胞的凋亡，降低p53的表達，促進腎小管上皮細胞的增殖，降低炎癥因子TNF-α、COX-2、IL-1β mRNA的相對表