葉酸、維生素B-,6-、B-,12-對(duì)腦缺血大鼠保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的 研究葉酸(folicacid)、維生素B6(VitaminB6，VB6)及維生素B12(VitaminB12，VB12)對(duì)局灶性腦缺血大鼠的保護(hù)作用，并探討其機(jī)制，為研究維生素防治腦血管疾病提供科學(xué)依據(jù)。 方法 1.高效液相色譜(highperformanceliquidchromatography，HPLC)測定血漿同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)方法的建立：血漿Hcy經(jīng)硼氫化鈉還原后與SBD-F進(jìn)

2、行衍生化反應(yīng)。反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)C18反相色譜柱分離，等度洗脫，熒光檢測器測定，以峰面積進(jìn)行定量。2.葉酸、VB6、VB12對(duì)腦缺血大鼠抗氧化作用的研究：選用SD成年大鼠，分為四組，假手術(shù)組(SO)，灌胃生理鹽水10ml/(kgbw·d)；缺血組(IM)，灌胃生理鹽水10ml/(kgbw·d)；缺血+葉酸組(IM+FA)，灌胃葉酸4mg/(kgbw·d)；缺血+復(fù)合維生素組(IM+CV)，灌胃葉酸4mg/(kgbw·d)，VB612mg/(kg

3、bw·d)，VB1224μg/(kgbw·d)。每組8只，雌雄各半。灌胃28d后制備大腦中動(dòng)脈閉塞(middlecerebralarteryocclusion，MCAO)模型，造成局灶性腦缺血。分別于灌胃前后和缺血后測定大鼠血漿Hcy濃度及血清抗氧化指標(biāo)。在缺血后測定大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力及腦組織抗氧化指標(biāo)，并進(jìn)行腦部磁共振(megneticresonanceimaging，MRI)掃描和腦組織光鏡病理觀察。3.葉酸、VB6、VB12對(duì)腦缺

4、血大鼠腦組織血紅素加氧酶(hemeoxygenase，HO)-1和HO-2mRNA表達(dá)作用的研究：缺血后取鼠腦，采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)技術(shù)，以β-actin為內(nèi)參基因，測定腦組織HO-1、HO-2mRNA的相對(duì)表達(dá)量。 結(jié)果 1.HPLC測定血漿Hcy，Hcy濃度在0-50μmol/L范圍內(nèi)與絕對(duì)峰面積呈線性關(guān)系，回收

5、率為96.40-104.30％，樣內(nèi)差異變異系數(shù)范圍2.45-3.64％，日內(nèi)差異變異系數(shù)范圍2.56-3.91％，日間差異變異系數(shù)范圍3.19-3.96％。2.①灌胃前，各組大鼠各項(xiàng)指標(biāo)均無顯著性差異(P＞0.05)。②灌胃后及缺血后，IM+FA組和IM+CV組血漿Hcy均低于灌胃前和SO、IM組(P＜0.05或P＜0.01)，且IM+CV組低于IM+FA組(P＜0.05)。③灌胃后缺血前，IM+FA組和IM+CV組血清超氧化物歧化酶

6、(superoxidedismutase，SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(glutathioneperoxidase，GSH-Px)活性高于灌胃前和SO、IM組(P＜0.05或P＜0.01)；血清丙二醛(maleicdialdehyde，MDA)含量低于灌胃前水平和SO、IM組(P＜0.05或P＜0.01)；血清乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase，LDH)活性和一氧化氮(nitricoxide，NO)含量與灌胃前和SO、

7、IM組相比均無顯著性差異(P＞0.05)。④建立MCAO模型后，IM+FA組和IM+CV組血清和腦組織SOD、GSH-Px活性高于IM組，MDA、NO含量低于IM組(P＜0.01)，血清LDH活性低于IM組(P＜0.01)。⑤IM+FA組和IM+CV組神經(jīng)功能缺失評(píng)分低于IM組(P＜0.01)，在Y型迷宮中受電擊次數(shù)也低于IM組(P＜0.01)，而記憶正確次數(shù)IM+CV組高于IM組(P＜0.05)。⑥MRI掃描結(jié)果：缺血后6h，IM+F

8、A組和IM+CV組ADC和DCavg值高于IM組(P＜0.05或P＜0.01)。⑦光鏡觀察結(jié)果：IM組腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞體積縮小，染色加深，胞漿及胞核固縮，與IM組相比，IM+FA組神經(jīng)細(xì)胞固縮減輕，IM+CV組腦組織病變改善明顯，形態(tài)接近SO組。3.IM+FA組和IM+CV組大鼠腦組織HO-1mRNA相對(duì)表達(dá)量低于IM組(P＜0.05或P＜0.01)，HO-2mRNA表達(dá)量高于SO組(P＜0.05)，與IM組無顯著性差異(P＞0.05)。

9、 結(jié)論 1.HPLC法測定血漿Hcy，靈敏度高，穩(wěn)定性及重復(fù)性好，可用于Hcy相關(guān)疾病的研究。2.葉酸、VB6和VB12能降低腦缺血大鼠血漿Hcy濃度，且聯(lián)合補(bǔ)充效果優(yōu)于單獨(dú)補(bǔ)充葉酸。3.葉酸能增加腦缺血大鼠SOD和GSH-Px活性，減少M(fèi)DA、NO含量和LDH活性，從而提高腦缺血大鼠的抗氧化能力。聯(lián)合補(bǔ)充VB6和VB12未見更佳效果。4.葉酸能增強(qiáng)腦缺血大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，改善神經(jīng)功能和缺血后腦組織形態(tài)，且與其聯(lián)合補(bǔ)充VB6