靈芝多糖抗腫瘤作用的分子機制研究.pdf

1、目的：通過建立 Lewis 肺癌小鼠腫瘤模型，研究靈芝多糖(GLP)在體外對Lewis肺癌細(xì)胞的作用和體內(nèi)對Lewis肺癌小鼠的作用效果以及對Lewis肺癌細(xì)胞Bax與P53蛋白基因表達(dá)的影響，探討靈芝多糖抗腫瘤作用的分子機制。 方法：首先進(jìn)行Lewis肺癌腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)，采用MTT法檢測GLP在體外對腫瘤細(xì)胞的作用，實驗設(shè)空白對照組、實驗對照組和不同濃度給藥組，測定了靈芝多糖不同濃度和不同作用時間對Lewis肺癌單層培養(yǎng)細(xì)胞的

2、作用，并應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)方法對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 其次通過建立Lewis肺癌小鼠腫瘤模型，對靈芝多糖在小鼠體內(nèi)抗Lewis肺癌作用的分子機制進(jìn)行了研究。實驗設(shè)空白對照組、靈芝多糖預(yù)防組、陽性對照組及靈芝多糖注射組。實驗過程中，在無菌條件下，將配好的Lewis肺癌細(xì)胞懸液(濃度1.5×10<'6>/mL)，以0.2mL/只接種于兩組小鼠右上肢腋下，接種48h后，空白對照組每天注射生理鹽水0.2mL/只，靈芝多糖免疫組每天肌肉注射靈芝多

3、糖(20mg/ml)0.2mL/只，陽性對照組每天肌肉注射生理鹽水0.2mL/只，靈芝多糖注射組每天肌肉注射靈芝多糖(20mg/ml)0.2mL/只。各組每天給藥一次，連續(xù)給藥七天。每天觀察各組小鼠的存活狀態(tài)、存活時間、體重變化情況及瘤體生長情況。然后停止給藥。停藥七天后，斷頸處死小鼠，采取腫瘤和小鼠胸腺，稱重，并計算抑瘤率、胸腺指數(shù)及荷瘤小鼠的生命延長率，數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 此外，實驗過程中采用MTT法檢測了不同處理條件下

4、各組小鼠淋巴細(xì)胞的增殖功能，并采用滴片法對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能進(jìn)行了測定。 最后，采用免疫組織化學(xué)方法檢測了靈芝多糖對 lewis肺癌細(xì)胞抑癌基因(bax基因與p53基因)表達(dá)量的影響。 結(jié)果：靈芝多糖在體外不能抑制lewis肺癌細(xì)胞的生長，而靈芝多糖在小鼠體內(nèi)實驗中則能較好的抑制lewis肺癌細(xì)胞的生長(p<0.05)。在應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測Bax和突變P53蛋白表達(dá)實驗中顯示：Lewis肺癌細(xì)胞中Bax

5、和突變P53均有不同程度的表達(dá)，生理鹽水組Bax表達(dá)弱，顆粒染色淺，呈棕黃色，而突變P53蛋白高表達(dá)，顆粒染色深，呈棕褐色，集中分布；GLP組則Bax表達(dá)較生理鹽水組高，顆粒染色較深，呈棕褐色，分布較為集中，而突變P53蛋白較生理鹽水組表達(dá)弱，呈棕黃色顆粒。實驗結(jié)果提示，靈芝多糖抗腫瘤的分子機制可能是通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞抑癌基因(bax基因與p53基因)表達(dá)實現(xiàn)的。 結(jié)論：1、靈芝多糖在體外實驗中不能抑制lewis肺癌細(xì)胞的生長。