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文檔簡介
1、目的:通過建立 Lewis 肺癌小鼠腫瘤模型,研究靈芝多糖(GLP)在體外對Lewis肺癌細(xì)胞的作用和體內(nèi)對Lewis肺癌小鼠的作用效果以及對Lewis肺癌細(xì)胞Bax與P53蛋白基因表達(dá)的影響,探討靈芝多糖抗腫瘤作用的分子機制。 方法:首先進(jìn)行Lewis肺癌腫瘤細(xì)胞培養(yǎng),采用MTT法檢測GLP在體外對腫瘤細(xì)胞的作用,實驗設(shè)空白對照組、實驗對照組和不同濃度給藥組,測定了靈芝多糖不同濃度和不同作用時間對Lewis肺癌單層培養(yǎng)細(xì)胞的
2、作用,并應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)方法對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 其次通過建立Lewis肺癌小鼠腫瘤模型,對靈芝多糖在小鼠體內(nèi)抗Lewis肺癌作用的分子機制進(jìn)行了研究。實驗設(shè)空白對照組、靈芝多糖預(yù)防組、陽性對照組及靈芝多糖注射組。實驗過程中,在無菌條件下,將配好的Lewis肺癌細(xì)胞懸液(濃度1.5×10<'6>/mL),以0.2mL/只接種于兩組小鼠右上肢腋下,接種48h后,空白對照組每天注射生理鹽水0.2mL/只,靈芝多糖免疫組每天肌肉注射靈芝多
3、糖(20mg/ml)0.2mL/只,陽性對照組每天肌肉注射生理鹽水0.2mL/只,靈芝多糖注射組每天肌肉注射靈芝多糖(20mg/ml)0.2mL/只。各組每天給藥一次,連續(xù)給藥七天。每天觀察各組小鼠的存活狀態(tài)、存活時間、體重變化情況及瘤體生長情況。然后停止給藥。停藥七天后,斷頸處死小鼠,采取腫瘤和小鼠胸腺,稱重,并計算抑瘤率、胸腺指數(shù)及荷瘤小鼠的生命延長率,數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 此外,實驗過程中采用MTT法檢測了不同處理條件下
4、各組小鼠淋巴細(xì)胞的增殖功能,并采用滴片法對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能進(jìn)行了測定。 最后,采用免疫組織化學(xué)方法檢測了靈芝多糖對 lewis肺癌細(xì)胞抑癌基因(bax基因與p53基因)表達(dá)量的影響。 結(jié)果:靈芝多糖在體外不能抑制lewis肺癌細(xì)胞的生長,而靈芝多糖在小鼠體內(nèi)實驗中則能較好的抑制lewis肺癌細(xì)胞的生長(p<0.05)。在應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測Bax和突變P53蛋白表達(dá)實驗中顯示:Lewis肺癌細(xì)胞中Bax
5、和突變P53均有不同程度的表達(dá),生理鹽水組Bax表達(dá)弱,顆粒染色淺,呈棕黃色,而突變P53蛋白高表達(dá),顆粒染色深,呈棕褐色,集中分布;GLP組則Bax表達(dá)較生理鹽水組高,顆粒染色較深,呈棕褐色,分布較為集中,而突變P53蛋白較生理鹽水組表達(dá)弱,呈棕黃色顆粒。實驗結(jié)果提示,靈芝多糖抗腫瘤的分子機制可能是通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞抑癌基因(bax基因與p53基因)表達(dá)實現(xiàn)的。 結(jié)論:1、靈芝多糖在體外實驗中不能抑制lewis肺癌細(xì)胞的生長。
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