外源性一氧化碳釋放分子(CORM-2)對脂多糖刺激后中性粒細胞功能的調(diào)控作用及分子機制.pdf

1、背景與目的：
　　膿毒癥（Sepsis）是主要由各種單一或混合型感染引起的一種全身性炎癥反應綜合癥，膿毒癥發(fā)生發(fā)展嚴重時可以導致多器官功能的衰竭、膿毒性休克甚至死亡。關于膿毒癥的發(fā)病機制十分復雜，至今尚未闡明，在膿毒癥發(fā)生的早期，機體感染部位可以迅速招募大量中性粒細胞，這些招募來的中性粒細胞可以通過吞噬病原微生物、脫顆粒釋放各種蛋白酶等物質(zhì)來達到殺滅細菌的作用。脂多糖（LPS）是革蘭氏陰性桿菌細胞壁的重要組成成分，是革蘭氏陰性桿菌

2、所致的膿毒癥時最重要的致病成分。作為外源性刺激因子LPS刺激中性粒細胞可以促進其釋放大量的IL-6、白細胞三烯B4、活性氧的炎性介質(zhì)，且LPS刺激的中性粒細胞可以在遠處器官大量的浸潤，而這是膿毒癥時SIRS以遠處器官損傷的重要原因。一氧化碳(CO)是一種無色無味的有毒氣體，前期實驗結(jié)果表明，CORM-2釋放的CO可以顯著的改善盲腸結(jié)扎并穿孔（CLP）小鼠以及LPS刺激小鼠的炎癥反應，有效的保護其重要臟器的損傷，提高生存率。而對LPS刺激

3、的中性粒細胞，CORM-2對其功能的調(diào)控尚無明確的報道。
　　方法：
　　采集健康成年志愿者靜脈血，采用Ficoll離心法分離健康成年人血液中中性粒細胞，采用隨機數(shù)字表法隨機分為對照組（CONTROL），內(nèi)毒素（LPS）組， LPS+CORM-2(10μM)組，LPS+CORM-2(50μM)組，LPS+iCORM-2組。采用流式細胞術檢測中性粒細胞的早期凋亡、活性氧的釋放以及吞噬功能；采用流式細胞術以及Elisa方法檢測中

4、性粒細胞顆粒釋放情況；采用瓊脂糖凝膠細胞遷移模型檢測中性粒細胞遷移能力；在熒光顯微鏡下計數(shù)中性粒細胞胞外誘捕網(wǎng)（NET）的數(shù)量；采用免疫蛋白印跡（WB）檢測中性粒細胞胞內(nèi)蛋白P38、ERK1/2、AKT的表達。
　　結(jié)果和結(jié)論：
　　1.LPS刺激能明顯促進中性粒細胞的早期凋亡、抑制中性粒細胞的遷移能力，而使用CORM-2干預后并不能明顯調(diào)控LPS對中性粒細胞的早期凋亡以及遷移能力的影響。實驗表明CORM-2對LPS刺激的中

5、性粒細胞的早期凋亡以及遷移能力無明顯的影響。
　　2. LPS刺激能明顯促進中性粒細胞顆粒的釋放以及吞噬功能，而使用CORM-2干預后能明顯的抑制LPS刺激中性粒細胞活性氧產(chǎn)生以及顆粒釋放，并且可以進一步增加中性粒細胞的吞噬功能。實驗表明CORM-2可以明顯的保護LPS刺激中性粒細胞的以確保其能更好的發(fā)揮功能。
　　3. LPS刺激并不能促進中性粒細胞胞外誘捕網(wǎng)的產(chǎn)生，而CORM-2干預能有效的促進LPS刺激中性粒細胞胞外誘