嗜酸乳桿菌亞油酸異構(gòu)酶的研究.pdf

1、亞油酸異構(gòu)酶(LinoleateIsomerase)是在培養(yǎng)液中存在亞油酸(LA)的前提下，某些微生物細(xì)胞菌體內(nèi)誘導(dǎo)生成的一種胞內(nèi)酶，是生物合成活性共軛亞油酸(CLA)所必需的酶。嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)由于具有較強(qiáng)的抵抗胃酸和膽堿的能力，近年來(lái)逐漸被作為發(fā)酵劑用于酸奶的發(fā)酵中。同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)，該菌具有較高的亞油酸異構(gòu)酶活力。本文利用MRS培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌，分別用平板菌落計(jì)數(shù)法和比濁法測(cè)定了菌體

2、生長(zhǎng)曲線，并對(duì)嗜酸乳桿菌產(chǎn)共軛亞油酸異構(gòu)酶的條件、亞油酸異構(gòu)酶活力的測(cè)定方法、亞油酸異構(gòu)酶的分離純化進(jìn)行了初步研究。 通過(guò)平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定嗜酸乳桿菌的生長(zhǎng)曲線可知，該菌在0～2h處于延滯期，2～12h進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，12～16h從對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期進(jìn)入穩(wěn)定期，16h以后菌體進(jìn)入衰亡期。在培養(yǎng)基中添加1mg/mL的LA對(duì)菌體的生長(zhǎng)有一定的抑制作用。利用比濁法可以快速確定出菌體是否進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。 嗜酸乳桿菌產(chǎn)酶培養(yǎng)的單因素試

3、驗(yàn)結(jié)果表明，培養(yǎng)溫度37℃，培養(yǎng)時(shí)間24h，每100mL培養(yǎng)基中添加10mgLA時(shí)都能獲得較高的酶活力。此外，向培養(yǎng)基中添加糖類(lèi)對(duì)產(chǎn)酶的影響不大，添加尿素、牛肉膏、酪蛋白、酵母膏等有機(jī)氮源有助于產(chǎn)酶，而含NH+4的無(wú)機(jī)氮源對(duì)產(chǎn)酶的影響不如有機(jī)氮。1.5g/mL的NaCl和1.0g/100mL的卵磷脂也有助于酶活力的提高，不過(guò)，在培養(yǎng)基中添加胡蘿卜汁不利于產(chǎn)酶，且添加量越大酶活力越低。 通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，確定出測(cè)定亞油酸