選擇性毀損腳橋被蓋核(PPTg)類膽堿能神經(jīng)元對(duì)帕金森(PD)大鼠步態(tài)的影響.pdf

1、研究目的:
　　當(dāng)帕金森病進(jìn)展到晚期階段，有大約一半的患者會(huì)出現(xiàn)軸性癥狀，比如:嚴(yán)重的步態(tài)和姿勢(shì)障礙（更具體的說(shuō)，凍僵步態(tài)和跌倒），并且不被左旋多巴與STN-DBS治療改善。近年來(lái)，有越來(lái)越多的證據(jù)表明，電刺激腦橋核(PPN-DBS)在緩解軸性癥狀中發(fā)生起著至關(guān)重要的作用。通過(guò)研究PD中的PPN和它的功能將有助于理解軸性癥狀的病理基礎(chǔ)和PPN-DBS治療的機(jī)制。因此，可以合理推測(cè)難治性軸性癥狀的發(fā)生與膽堿能神經(jīng)元變性更相關(guān)，而不是

2、多巴胺能神經(jīng)元變性。在本研究中，進(jìn)一步探討PPN膽堿能神經(jīng)元在大鼠發(fā)生運(yùn)動(dòng)障礙中的作用。特別是軸性運(yùn)動(dòng)障礙。
　　研究方法:
　　本實(shí)驗(yàn)選用42只健康成年雄性SD大鼠隨機(jī)分四組:(1)生理鹽水注射假手術(shù)組(2)6-羥基多巴胺(6-OHDA)毀損單側(cè)黑質(zhì)致密部(SNc)組(3)anti-ChAT-SAP毀損單側(cè)腳橋被蓋核(PPTg)組(4)6-羥基多巴胺（6-OHDA）毀損單側(cè)黑質(zhì)致密部(SNc)合并anti-ChAT-SAP

3、毀損同側(cè)腳橋被蓋核(PPTg)組（聯(lián)合毀損組）。anti-ChAT-SAP是一種帶皂素(SAP)（皂類植物種子中提取的可使核糖體失活蛋白）的特異性抑制膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)的兔源性抗體毒藥。右側(cè)定位內(nèi)側(cè)前腦束(MFB)注射4ul6-OHDA。靶向抗膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶IgG免疫毒素(anti-ChAT-SAP)注入右側(cè)PPTg毀損膽堿能神經(jīng)元，通過(guò)注射相同劑量的生理鹽水到右側(cè)MFB和PPTg造成假毀損。
　　使用Catwalk XT

4、系統(tǒng)(Noldus信息技術(shù)，瓦赫寧恩，荷蘭)分析自由活動(dòng)的大鼠的步態(tài)。在毀損術(shù)后重新進(jìn)行行為學(xué)評(píng)估的過(guò)程中，除了假手術(shù)組，其他大鼠在測(cè)試中均表現(xiàn)出輕到中度的凍僵步態(tài)（起步延遲）。由于凍結(jié)步態(tài)（起步延遲）而不能完成整個(gè)階段的（包括少于三次通過(guò)通道的）計(jì)入凍結(jié)步態(tài)的數(shù)量，計(jì)算每一組中凍僵步態(tài)數(shù)量占測(cè)試階段的全部數(shù)量的百分比。最后完成行為學(xué)測(cè)試后，SNc通過(guò)酪氨酸羥化酶(TH)免疫組織化學(xué)染色法如前所述。此程序適用于PPTg的ChAT免疫組織

5、化學(xué)染色方法，染色后，使用Leica顯微攝像程序組獲取圖片。根據(jù)光學(xué)分餾器原理對(duì)SNc中TH+的神經(jīng)元或者PPTg中ChAT+的神經(jīng)元數(shù)量進(jìn)行定量分析評(píng)估。以每6張覆蓋了完整SNc或者PPTg的切片取得的均值為計(jì)數(shù)值。數(shù)據(jù)以完整一側(cè)相應(yīng)區(qū)域的百分比記錄。
　　研究結(jié)果:
　　在SNc毀損組DA神經(jīng)元的平均損失90.19％，單純SNc毀損組與聯(lián)合毀損組之間沒(méi)有組間差異。在PPTg毀損組的膽堿能神經(jīng)細(xì)胞的損失達(dá)到了77.62％，

6、在聯(lián)合毀損組達(dá)到81.75％，兩者與假手術(shù)組相比明顯降低。單純PPTg毀損組與聯(lián)合毀損組膽堿能細(xì)胞的損失沒(méi)有顯著差異。Catwalk行為學(xué)分析系統(tǒng)捕捉動(dòng)態(tài)和靜態(tài)的步態(tài)參數(shù)。損傷后，與假手術(shù)組和PPTg毀損組相比SNc毀損組和聯(lián)合毀損組的跑動(dòng)時(shí)長(zhǎng)、站立時(shí)間和步替循環(huán)明顯增加步幅長(zhǎng)度和擺動(dòng)速度明顯下降。SNc毀損組與聯(lián)合毀損組無(wú)顯著差異。最大接觸面積和平均強(qiáng)度的相互作用只出現(xiàn)在左側(cè)爪?。▽?duì)側(cè)腦損傷）。與假手術(shù)組和PPTg毀損組相比，左前爪和

7、左后爪在SNc毀損組和聯(lián)合毀損組中這兩個(gè)步態(tài)參數(shù)顯著下降。而SNc毀損組和聯(lián)合毀損組之間無(wú)差異。與假手術(shù)組和PPTg毀損組比較，SNc毀損組和聯(lián)合毀損組的爪（前或后）間寬距參數(shù)明顯增加，而在前肢只有微弱增加。在SNc毀損組和聯(lián)合毀損組中所有足印的終末雙足著地時(shí)間都有顯著增加。并且聯(lián)合毀損組高于SNc毀損組。在四組中SNc毀損組和聯(lián)合毀損組出現(xiàn)了最嚴(yán)重的凍結(jié)步態(tài)癥狀(57.58％，p＜0.05)。從某種程度上說(shuō)，與假手術(shù)組相比，單純毀損S

8、Nc也會(huì)誘發(fā)大鼠出現(xiàn)FOG(26.66％，p＜0.05，)。假手術(shù)和PPTg毀損組大鼠無(wú)顯著差異(0％vs.13.88％)。在PPTg毀損組中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)膽堿能神經(jīng)元與步態(tài)參數(shù)變化存在相關(guān)性。在聯(lián)合毀損組，只有左側(cè)肢體的終末雙足著地時(shí)間與膽堿能神經(jīng)元存在相關(guān)（偏相關(guān)系數(shù):左前肢:-0.77，P=0.04;左后肢:-0.79，P=0.02），其他參數(shù)無(wú)顯著相關(guān)性。
　　研究結(jié)論:
　　結(jié)果表明，單純毀損PPTg大鼠不會(huì)引起步態(tài)異常