STMN1基因在食管癌侵襲轉(zhuǎn)移及治療中作用機(jī)理研究.pdf

1、食管癌是世界常見腫瘤之一，其早期癥狀不明顯，診斷時(shí)多為中晚期，易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。越來越多的研究表明，stathmin在多種腫瘤中高表達(dá)，并與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期、不良預(yù)后、腫瘤耐藥等多種臨床參數(shù)相關(guān)。然而，stathmin在促進(jìn)食管癌進(jìn)程的相關(guān)機(jī)理尚不清楚，有待深入研究。
　　本論文由兩部分組成，第一部分揭示了stathmin促進(jìn)食管癌細(xì)胞體內(nèi)外侵襲轉(zhuǎn)移和增殖。本研究基于前期實(shí)驗(yàn)室通過蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)stathmin在食管癌

2、組織中的水平顯著升高。檢測(cè)食管癌患者血清stathmin水平，發(fā)現(xiàn)stathmin血清水平顯著升高，并與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示stathmin與食管癌轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性。通過構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)stathmin細(xì)胞系，采用劃痕、Transwell和集落形成等實(shí)驗(yàn)證實(shí)stathmin促進(jìn)食管癌細(xì)胞體外侵襲轉(zhuǎn)移和增殖。為了進(jìn)一步探索stathmin促進(jìn)食管癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的機(jī)制，采用轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)分析stathmin過表達(dá)細(xì)胞內(nèi)的分子水平變化。采用實(shí)時(shí)定量P

3、CR驗(yàn)證，結(jié)果顯示stathmin過表達(dá)細(xì)胞內(nèi)黏附相關(guān)分子NT5E、LYPD3、CLCA2、CEACAM5、FAK、RASSF5、FN和中間纖維家族分子KRT6C、KRT15、KRT17、KRT13的mRNA水平顯著升高。黏附實(shí)驗(yàn)分析顯示過表達(dá)stathmin食管癌細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附能力增強(qiáng)。免疫印跡分析，發(fā)現(xiàn)stathmin過表達(dá)細(xì)胞內(nèi)integrinα5β1、FAK及P-ERK蛋白水平升高，而integrinβ3、β4、β5、v

4、inculin及ERK的水平無顯著;此外keratin17的蛋白水平亦顯著升高。敲降stathmin表達(dá)，integrinα5β1、FAK及P-ERK蛋白水平降低，ERK無顯著改變。然而，敲降FAK、或封閉integrinα5活性，可抑制細(xì)胞與外基質(zhì)的黏附;敲降FAK或抑制ERK磷酸化，可抑制細(xì)胞的移行。以上結(jié)果提示integrinα5β1/FAK/ERK通路在stathmin過表達(dá)細(xì)胞移行中發(fā)揮重要作用。論文第一部分揭示了stathm

5、in促進(jìn)食管癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)理。
　　論文第二部分揭示了過表達(dá)stathmin降低食管癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇化療敏感性。基于stathmin在細(xì)胞內(nèi)具有調(diào)控微管穩(wěn)定的活性，通過構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)stathmin的食管癌細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)stathmin過表達(dá)顯著增強(qiáng)食管癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇的耐受性，在相同處理?xiàng)l件下，紫杉醇對(duì)過表達(dá)stathmin細(xì)胞的抑制率顯著下降。紫杉醇通過誘導(dǎo)caspase8、caspase9的活化，激發(fā)食管癌細(xì)胞凋亡，未見自噬相關(guān)