Lin-4和環(huán)狀RNA在渦蟲干細胞中相關(guān)功能研究.pdf

1、渦蟲是扁形動物門，渦蟲綱、兩側(cè)對稱的真后生動物。渦蟲具有極強的再生能力，這主要是因為它體內(nèi)具有被稱為副胚層（neoblasts）的成體多能干細胞群，當渦蟲受到損傷時，副胚層就可以分化成相應的器官或組織。渦蟲已成為研究機體修復、再生及干細胞體分子機理的模式生物之一。
　　microRNA(miRNA)是一類長約21-25nt的非編碼小RNA分子，通過與靶基因互補結(jié)合來調(diào)控基因表達，在發(fā)育、分化、增殖、凋亡、腫瘤形成、新陳代謝及疾病發(fā)

2、生等多種生理過程中發(fā)揮重要作用。lin-4是1993年在秀麗新小桿線蟲中被發(fā)現(xiàn)的第一個miRNA，并對蟲體的發(fā)育起重要的調(diào)控作用。Lin-4在哺乳動物中的同源序列被命名為miR-125，研究發(fā)現(xiàn)miR-125對干細胞的增殖和分化具有重要的調(diào)控作用。在本實驗室對渦蟲再生研究中發(fā)現(xiàn)，lin-4在再生渦蟲中表達差異顯著，并對渦蟲的再生起重要調(diào)控作用。
　　在本研究中，我們研究了日本三角渦蟲處于再生狀態(tài)時， lin-4所參與的調(diào)控作用。從

3、表達（時間、空間表達譜）和功能（調(diào)控機制）2個方面來研究l i n-4及其靶基因在渦蟲再生過程中的功能和作用。通過合成 lin-4反義寡核苷酸，顯微注射至渦蟲體內(nèi)進行RNA干擾并利用實時定量PCR檢測lin-4及其靶基因的表達量變化，進而分析靶基因的功能。通過原位雜交實驗檢測 lin-4及其靶基因在日本三角渦蟲不同再生過程中的空間分布。結(jié)果顯示：lin-4及其靶基因在渦蟲再生中表達差異顯著，其分布和副胚層干細胞的分布基本吻合，且都趨于傷

4、口處表達，并且在12h和72h時表達差異最明顯。根據(jù)實驗結(jié)果推測lin-4及其靶基因在渦蟲再生過程中很可能參與副胚層的形成，在全身性細胞分裂期和由傷口誘導的細胞分裂期起重要調(diào)控作用。
　　本研究還通過高通量測序分析，得到再生渦蟲的7條環(huán)狀RNA，而環(huán)狀RNA的miRNA結(jié)合位點分析表明預測的其中一條環(huán)狀RNA和lin-4存在結(jié)合位點，因此推測該環(huán)狀RNA有可能通過調(diào)節(jié)lin-4對其靶基因的調(diào)控，進而在渦蟲的再生過程中起重要作用。<