microRNA-30s在順鉑誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡中的作用研究.pdf

1、急性腎損傷 AKI是一種臨床上常見的、由多因素引起的急性綜合征。AKI進(jìn)展迅速，患者預(yù)后不良，因此厘清AKI的發(fā)病機(jī)制，進(jìn)而找到預(yù)防AKI的方法至關(guān)重要。順鉑是一種廣譜抗癌藥，但其明顯的腎毒性制約它的臨床使用范圍。順鉑的腎毒性表現(xiàn)在很多方面，其中細(xì)胞凋亡是順鉑誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞死亡的主要機(jī)制。
　　microRNA是一類小非編碼RNA，約15-20個(gè)核苷酸組成。成熟miRNA可以通過種子序列與其靶基因的3-UTR完全或不完全配對，

2、降解其mRNA或抑制其轉(zhuǎn)錄后翻譯來調(diào)控基因的表達(dá)。本課題組以前的研究證實(shí)miR30s是腎小管上皮細(xì)胞中豐度最高的miRNA家族，最近有文獻(xiàn)報(bào)道m(xù)iR30s可調(diào)控腎小球足細(xì)胞的凋亡，但miR30s是否參與順鉑誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡的過程卻未見報(bào)道。
　　目的:
　　明確miR30s在順鉑誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡中的作用并找到其參與調(diào)控腎小管上皮細(xì)胞凋亡的靶基因，闡明機(jī)制。
　　方法:
　　流式細(xì)胞術(shù)和蛋白質(zhì)印跡實(shí)

3、驗(yàn)檢測體內(nèi)及體外腎小管上皮細(xì)胞凋亡情況。Real-time PCR檢測順鉑腎毒性動物模型和順鉑細(xì)胞凋亡模型中miR30s的變化情況。上調(diào)或下調(diào)miR30c探討其對順鉑誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用。比較生物信息學(xué)軟件預(yù)測的miR30s靶基因與AKI細(xì)胞及動物模型中上調(diào)的基因，找出其中可能參與腎小管上皮細(xì)胞凋亡過程的基因，并檢測其在 AKI細(xì)胞模型和動物模型中的表達(dá)變化情況。
　　結(jié)果:
　　10uM順鉑處理后48h及72h

4、，超過10％的HK2細(xì)胞發(fā)生凋亡；同時(shí)wistar大鼠腹腔注射10mg/kg順鉑后第3天和7天發(fā)生腎小管上皮細(xì)胞凋亡，在腎小管上皮細(xì)胞凋亡的過程中，miR30s表達(dá)均明顯下調(diào)。外源性上調(diào)或抑制細(xì)胞內(nèi)miR30c可以減輕或加重由順鉑誘導(dǎo)的凋亡。miR30s的直接靶基因Bim、Bnip3l、Adrb1、Hspa5、MAP3K12在順鉑誘導(dǎo)的凋亡過程中上調(diào)。
　　結(jié)論:
　　1.在順鉑誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡細(xì)胞細(xì)胞及動物模型中，