黃連素對多囊卵巢綜合征大鼠高雄激素狀態(tài)及StAR蛋白質(zhì)、mRNA表達的影響.pdf

1、目的：
　　在中醫(yī)“PCOS臨床表現(xiàn)屬濕熱證”和西醫(yī)“胰島素抵抗是PCOS基本病理變化”理論指導(dǎo)下，以“黃連素清熱燥濕、改善胰島素抵抗”為切入點，分析總結(jié)黃連素治療PCOS的作用和機理。從動物實驗的角度系統(tǒng)檢測黃連素對PCOS大鼠體重、睪酮、空腹胰島素和血糖、性激素結(jié)合球蛋白的影響，觀察黃連素減輕PCOS大鼠卵巢多囊樣變程度和促排卵作用，評價黃連素是否具有治療PCOS的作用，分析StAR在黃連素治療PCOS大鼠過程中的變化，探討黃

2、連素通過何途徑治療PCOS及其作用機制。
　　方法：
　　1、造模方法：將6周齡SPF級雌性SD大鼠48只，喂以顆粒飼料，自由飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天。之后將48只大鼠隨機分成兩組：正常對照組（N=12）和造模組（N=36）。正常對照組大鼠用1％羧甲基纖維素灌胃，連續(xù)灌胃21天；造模組大鼠用來曲唑1mg/kg+1%羧甲基纖維素灌胃，連續(xù)灌胃21天，以建立來曲唑誘導(dǎo)的PCOS大鼠模型。
　　2、分組及治療方法
　　將造

3、模成功的大鼠隨機等分為模型對照組、二甲雙胍組、黃連素組，造模結(jié)束后開始灌胃給藥，給藥方案如下：
　　A（空白對照組）：N=12，不造模，按4ml/kg/d灌服1%羧甲基纖維素，連續(xù)3周；
　　B（模型對照組）：N=12，造模后，按4ml/kg/d灌服1%羧甲基纖維素，連續(xù)3周；
　　C（二甲雙胍組）：N=12，造模后，給予二甲雙胍加入4ml/kg/d的1%羧甲基纖維素中灌服。按人和動物間體表面積折算的等效劑量比值表；二

4、甲雙胍治療PCOS常用劑量為每次口服500mg，每日3次；換算后大鼠給藥量為135mg/kg/d，連續(xù)用藥3周；
　　D（黃連素組）：N=12，造模后，給予黃連素加入4ml/kg/d的1%羧甲基纖維素中灌服。按人和動物間體表面積折算的等效劑量比值表；黃連素人的常用劑量為每次0.3g，每日3次；換算后大鼠黃連素給藥量為81mg/kg/d，連續(xù)用藥3周。
　　3、觀察指標
　　3.1觀察治療前后各組大鼠體重、血清睪酮值的變

5、化。
　　3.2觀察大鼠空腹胰島素、空腹血糖及性激素結(jié)合球蛋白在治療后各組之間的差異。
　　3.3觀察治療后各組大鼠卵巢形態(tài)學差異。
　　3.4通過免疫組化和PCR技術(shù)，觀察治療后各組大鼠卵巢中雄激素合成的關(guān)鍵因子StAR蛋白質(zhì)表達及mRNA表達水平。
　　結(jié)果：
　　1、造模結(jié)果
　　本實驗來曲唑誘導(dǎo)的模型大鼠出現(xiàn)典型的PCOS表現(xiàn)，符合PCOS診斷標準：陰道脫落細胞涂片失去規(guī)律動情周期，陰道上皮細

6、胞均停留在早卵泡期階段，提示無排卵；病理結(jié)果顯示大鼠卵巢呈多囊樣改變；血清睪酮升高；體重增加；空腹胰島素升高，提示存在胰島素抵抗。因此，本實驗選用來曲唑成功地制造了PCOS大鼠模型。
　　2、體重
　　來曲唑誘導(dǎo)的PCOS大鼠體重明顯升高（與空白對照組比較P<0.05），二甲雙胍與黃連素均能控制PCOS大鼠體重（與模型對照組比較P<0.05），但無法使之恢復(fù)與正常大鼠體重一致（與空白對照組比較P<0.05）。
　　3、

7、睪酮
　　來曲唑誘導(dǎo)的 PCOS大鼠血清睪酮明顯升高（與空白對照組比較P<0.05），二甲雙胍不能降低 PCOS大鼠血清睪酮值（與模型對照組比較P>0.05），黃連素可降低 PCOS大鼠血清睪酮值（與模型對照組比較P<0.05），但無法使之恢復(fù)到與正常大鼠睪酮值一致（與空白對照組比較P>0.05）。
　　4、空腹胰島素
　　來曲唑誘導(dǎo)的 PCOS大鼠空腹胰島素升高（與空白對照組比較P<0.05），二甲雙胍和黃連素均使P

8、COS大鼠空腹胰島素降至正常水平（與空白對照組比較P>0.05），二甲雙胍組與黃連素組無明顯差異（P>0.05）。
　　5、空腹血糖
　　來曲唑誘導(dǎo)的PCOS大鼠空腹血糖正常（與空白對照組比較P>0.05）。
　　6、性激素結(jié)合球蛋白
　　本實驗來曲唑造模的 PCOS大鼠 SHBG升高（與空白對照組比較P<0.05），各組大鼠SHBG水平及游離睪酮指數(shù)與睪酮值成正相關(guān)。
　　7、卵巢光鏡下病理
　　來

9、曲唑誘導(dǎo)的PCOS大鼠卵巢增大，卵巢表面蒼白，卵巢外膜增厚，卵巢內(nèi)卵泡呈多囊樣改變，卵泡膜細胞層增厚，卵巢內(nèi)未見黃體，提示無排卵。經(jīng)過治療后，二甲雙胍組仍存在上述病理表現(xiàn)，且與模型對照組無明顯差異；黃連素組在治療后卵巢體積縮小，卵巢外膜變薄，囊性變卵泡數(shù)量減少，未見囊性變卵泡聚集的現(xiàn)象，且卵巢內(nèi)可見多個黃體，提示有稀發(fā)排卵。
　　8、StAR
　　免疫組化結(jié)果可以看出來曲唑誘導(dǎo)的PCOS大鼠卵泡膜細胞的細胞膜附近StAR密度

10、明顯升高（與空白對照組比較P<0.05），二甲雙胍組StAR的密度與模型對照組無明顯差異（P>0.05），黃連素組StAR密度小于二甲雙胍組及模型對照組（P<0.05）但大于空白對照組（P<0.05）。觀察發(fā)現(xiàn)StAR蛋白表達量與睪酮值成正相關(guān)。
　　分析PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)：StAR在卵巢組織內(nèi)的mRNA表達水平與StAR蛋白質(zhì)密度成正相關(guān)。說明StAR不僅在卵巢組織內(nèi)高表達，同時也是在卵巢組織內(nèi)大量合成的。
　　結(jié)論：