miR-146a調(diào)控破骨細胞分化以及在老年性骨質(zhì)疏松癥中的作用機制研究.pdf

1、骨質(zhì)疏松是以骨量減低，骨組織細微結(jié)構(gòu)退變?yōu)樘卣鞯娜硇约膊?，可以?dǎo)致骨脆性增加。骨質(zhì)疏松的主要危害是導(dǎo)致骨折，造成病患身心創(chuàng)傷，降低生活質(zhì)量，增加社會成本。今年來隨著社會老齡化的加速，人口平均年齡的增加，老年性骨質(zhì)疏松癥發(fā)病明顯增多，與此同時，由此造成的骨折發(fā)病率也呈明顯上升勢頭，已經(jīng)嚴重影響到了老年人的健康安全。骨質(zhì)疏松形成的原因是骨吸收的增加以及骨生成的減少所造成的骨代謝負平衡。對于老年性骨質(zhì)疏松而言，其由破骨細胞造成的骨吸收作用占

2、主導(dǎo)地位。目前對于基因在生理及病理生理狀態(tài)下對破骨細胞分化成熟的調(diào)控機制仍然不十分明確。
　　miR-146a與免疫和炎性反應(yīng)密切相關(guān)，其靶基因腫瘤壞死因子(TNF)受體相關(guān)因子6(TRAF6)在破骨細胞融合成熟的過程中起著重要作用。同時由于miR-146a調(diào)控了炎性反應(yīng)，間接參與了破骨細胞的分化過程。
　　在本實驗中，我們分別觀察2月齡，6月齡，12月齡的miR-146a基因敲除小鼠的來模擬老年性骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病過程，使用

3、micro-CT技術(shù)，對小鼠腰椎以及脛骨松質(zhì)骨相關(guān)參數(shù)進行檢測，發(fā)現(xiàn)2月齡，6月齡小鼠松質(zhì)骨量未減少，而12月齡基因敲除小鼠松質(zhì)骨骨小梁數(shù)量減少，間距增寬，確定了該老年性骨質(zhì)疏松模型的可靠性;使用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色技術(shù)對miR-146a敲除小鼠腰椎椎體內(nèi)破骨細胞活性進行檢測，在基因敲除小鼠中破骨細胞數(shù)量明顯多于野生型小鼠體內(nèi)的破骨細胞數(shù)量，表明miR-146a敲除可以增加破骨細胞生成能力;在使用免疫組織化學(xué)法對炎癥相關(guān)的

4、蛋白(TRAF6，IL-6，TLR4)以及破骨細胞分化蛋白(Nfatc1)、成骨細胞產(chǎn)生的蛋白(OPG，osteocalcin)進行檢測，發(fā)現(xiàn)TRAF6，IL-6以及TLR4表達在miR-146a基因敲除小鼠中增高，Nfatc1表達也增高，而成骨相關(guān)指標降低;最后，通過體外骨髓來源單核細胞破骨細胞分化實驗對破骨細胞成熟分化相關(guān)基因及蛋白進行檢測，從而最終確定miR-146a通過調(diào)控RANKL/Nfatc1信號通路來控制破骨細胞由破骨細胞