彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中RASSF2A基因甲基化分析及其臨床意義研究.pdf

1、目的：淋巴瘤是最早發(fā)現(xiàn)的血液系統(tǒng)惡性腫瘤之一，近年來其發(fā)病率呈上升趨勢，雖然淋巴瘤的治療方法不斷改善，經(jīng)過聯(lián)合化療后得以延長半數(shù)以上患者的生存期，但仍然有部分患者死于腫瘤的進(jìn)展。因此關(guān)注淋巴瘤病因?qū)W研究、早期診斷及靶向治療是十分必要的。
　　近年來，越來越多的研究表明表觀遺傳在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起到重要作用，而DNA甲基化水平改變是目前研究最為廣泛的表觀遺傳學(xué)機(jī)制之一。RASSF2是RASSF家族中的一員，是一種抑癌基因。RAS

2、SF2包括RASSF2A、RASSF2B和RASSF2C三個(gè)轉(zhuǎn)錄本。其中RASSF2A具有促進(jìn)細(xì)胞凋亡和抑制生長作用，同時(shí)它還能抑制炎癥因子表達(dá)，達(dá)到抑制腫瘤浸潤的目的。有研究發(fā)現(xiàn)，在結(jié)腸癌、結(jié)腸癌細(xì)胞系以及結(jié)腸腺瘤中RASSF2A基因啟動(dòng)子區(qū)普遍存在高甲基化，而在胃癌、子宮內(nèi)膜癌、鼻咽癌、肺癌中也能檢測到RASSF2A啟動(dòng)子區(qū)甲基化現(xiàn)象的發(fā)生。甲基化是導(dǎo)致RASSF2A基因失活的重要機(jī)制。但至今，RASSF2A在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中的

3、相關(guān)研究尚未見報(bào)道。本研究采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcriptase-PCR， RT-PCR)和甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(Methylation-Specific PCR，MSP)的方法，以正常人外周血為對照，檢測彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者外周血中的RASSF2A基因甲基化狀態(tài)及mRNA表達(dá)情況，并結(jié)合相應(yīng)的臨床資料分別作相關(guān)性分析，為彌漫大 B細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)病機(jī)制、臨床診斷及治療提供一定的理論依據(jù)。
　　方

4、法：
　　1應(yīng)用MSP檢測彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者外周血以及正常人外周血的RASSF2A基因甲基化狀態(tài)，并分析該基因甲基化與臨床資料之間的關(guān)系。
　　2應(yīng)用RT-PCR檢測彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者外周血以及正常人外周血的RASSF2A基因mRNA的相對表達(dá)量，并分析該基因mRNA相對表達(dá)量與臨床資料之間的關(guān)系。
　　3采用SPSS19.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1 RASSF2A基因在彌漫大

5、 B細(xì)胞淋巴瘤患者外周血中甲基化率為42.5％(17/40)，顯著高于正常人外周血的甲基化率10.0%(4/40)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RASSF2A基因在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者的外周血中的甲基化與患者的 Ki-67、結(jié)外累及與否以及 LDH相關(guān)，與正常人外周血相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與患者的 IPI評分、骨髓累及與否、年齡、性別、A/B癥狀、生發(fā)中心或非生發(fā)中心、β2微球蛋白以及臨床分期均無關(guān)，與正常人外

6、周血相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2 RASSF2A基因在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者外周血中的mRNA表達(dá)量為0.49±0.13，明顯低于在正常人外周血中的mRNA的表達(dá)量0.56±0.17，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RASSF2A基因在彌漫大 B細(xì)胞淋巴瘤患者外周血中mRNA的表達(dá)量與患者IPI評分、結(jié)外累及與否、Ki-67以及LDH相關(guān)的，與正常人對照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與患者的A/

7、B癥狀、年齡、性別、β2微球蛋白、生發(fā)中心或非生發(fā)中心、臨床分期、骨髓累及與否均無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者的外周血中的RASSF2A基因啟動(dòng)子的檢測結(jié)果表明其甲基化為陽性，其mRNA平均相對表達(dá)量為0.41±0.12，甲基化陰性的mRNA平均相對表達(dá)量為0.55±0.11，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者外周血中RASSF2A的

8、甲基化率明顯高于正常對照組的甲基化率，提示RASSF2A基因啟動(dòng)子甲基化可能與彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤發(fā)生相關(guān)。
　　2彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者外周血中RASSF2A基因mRNA的表達(dá)明顯低于正常人對照組，提示RASSF2A基因可能在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤具有抑癌基因的作用。
　　3彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者外周血中RASSF2A基因啟動(dòng)子呈高甲基化，其mRNA表達(dá)降低，提示彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中RASSF2A基因甲基化可能與其mRNA表達(dá)降