利用LEDGF-P75蛋白構(gòu)建HIV-1整合酶抑制劑篩選模型及對菇類活性成分的研究.pdf

1、HIV-1整合酶（IN）是HIV-1生命周期中必不可少的三大關鍵酶之一。在人體內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)IN的同源類似物，因此，IN成為設計抗HIV-1藥物的理想靶點。與逆轉(zhuǎn)錄酶和蛋白酶相比，對整合酶抑制劑的研究比較少，很大程度上是因為缺乏一個合適的、可以進行大規(guī)模初步篩選的模型。
　　晶狀體上皮細胞源性生長因子（LEDGF/p75）是第一個被發(fā)現(xiàn)的輔助IN完成整合作用的輔助因子。本研究就利用IN與LEDGF/p75相互作用為靶點，通過檢測報告基

2、因表達產(chǎn)生的酶活性以及氨基酸缺陷檢測IN與LEDGF/p75相互作用程度，構(gòu)建整合酶抑制劑篩選體系。用D77為正對照驗證此模型，證實其特異性較強、結(jié)果穩(wěn)定性好。據(jù)研究氧化應激與HIV-1存在著密不可分的關系，因此抗氧化劑很有可能存在著潛在的抗艾滋活性。相比合成類抗氧化劑，天然類抗氧化劑具有多效性、毒副作用低等特點，成為藥物篩選的首選資源。
　　本研究中利用構(gòu)建的酵母雙雜交篩選體系對14種天然產(chǎn)物進行了抗艾滋活性的探索，結(jié)果顯示得出

3、兒茶素、花青素、紫杉醇等小分子天然產(chǎn)物具有較好的抑制IN與LEDGF/p75相互作用活性。本研究選取了多種菇類子實體以抗氧化活性為指標進行初篩，最后確定以斑褐孔菌（Fomitiporia punctata）子實體為研究對象。斑褐孔菌子實體粉末經(jīng)一定濃度的乙醇高溫浸提，大孔樹脂、葡聚糖凝膠LH-20、HPLC分離純化得到樣品PD。對PD進行定性分析得出它是一種不含糖和蛋白等大分子物質(zhì)的多酚混合物，其中多酚含量約為57.16％。在濃度為25

4、0μg/ml時，PD的抑制紅細胞溶血活性約為65.1%，抑制脂質(zhì)過氧化活性約為86.9%，超氧陰離子清除活性為93.7%，羥基自由基清除活性為84.8%。用所構(gòu)建的酵母雙雜交篩選體系檢測PD對IN與LEDGF/p75相互作用的抑制活性，抑制率約為41%，并且還具有較好的抑制整合酶切割活性。該研究在一定程度上證明了天然產(chǎn)物的多效性以及抗氧化與抗艾滋之間有一定的關聯(lián)，從抗氧化劑中尋找抗HIV-1活性的物質(zhì)是可行的。
　　本研究以IN與