血漿中游離藥物濃度相關(guān)參數(shù)分析及其在治療藥物監(jiān)測中的應(yīng)用.pdf

1、長期以來，臨床治療藥物監(jiān)測(TDM)一直是一項保障臨床用藥安全、有效的重要工作。目前，用藥物總濃度(Ct)去評價藥效和指導(dǎo)臨床用藥是臨床TDM常用的手段。然而，游離藥物才是真正發(fā)揮藥理學(xué)效應(yīng)的部分，因此血漿中游離藥物濃度(Cf)被認為是藥效學(xué)和安全性評估的直接依據(jù)。不管是Ct，還是Cf，其均為瞬時血藥濃度，不能反映藥物在體內(nèi)的整體情況，且極易受到取樣時間的影響，由于代謝速率的個體差異，在峰濃度或谷濃度處采集的樣品并非真實的峰濃度或谷濃度

2、。血漿蛋白結(jié)合率(PPB)作為表征藥物與血漿蛋白結(jié)合程度的重要參數(shù)，在病情平穩(wěn)的一段時間內(nèi)是恒定的，可反映藥物在體內(nèi)的整體情況。然而，由于患者間疾病條件和生理狀態(tài)不同，患者間的PPB個體差異較大，PPB的變化直接影響Cf的變化，從而影響藥物療效的發(fā)揮和毒副反應(yīng)的發(fā)生。因此，監(jiān)測不同患者的PPB，對臨床用藥的安全性、有效性具有非常重要的臨床意義。此外，用較長時間內(nèi)恒定的PPB和直接起到藥理學(xué)效應(yīng)的Cf同時指導(dǎo)個體化給藥劑量的調(diào)整，比單一瞬

3、時血藥濃度(Cf或Ct)更具有科學(xué)性、準(zhǔn)確性。PPB分析首先需要進行Ct的分析，臨床TDM常用Ct的分析方法包括沉淀蛋白法(PPT)、液液萃取法(LLE)、固相萃取法(SPE)等，這些方法步驟繁瑣、耗時，且極易造成待測物在處理過程中的損失。隨著分析技術(shù)的發(fā)展，直接進樣技術(shù)越來越成為研究的熱點及分析家們夢寐以求的。中空纖維離心超濾法(HFCF-UF)作為直接進樣技術(shù)，通過改變pH使結(jié)合藥物釋放來實現(xiàn)對蛋白結(jié)合型藥物頭孢克洛Ct的分析。然而

4、改變pH的方法僅可用于水溶性蛋白結(jié)合藥物Ct的分析，并不適用于脂溶性蛋白結(jié)合藥物Ct的分析，這可能是由于藥物與血漿蛋白結(jié)合于脂溶性區(qū)域，pH的改變并不能作用于該區(qū)域。此外，即使pH的改變使結(jié)合型藥物釋放，釋放下來的脂溶性藥物并不能復(fù)溶于水溶性的基質(zhì)中，而聚集或附著在蛋白的表面無法進入中空纖維內(nèi)部被分析測定。因此，脂溶性蛋白結(jié)合型藥物Ct的分析不得不選用繁瑣、復(fù)雜、耗時、分析誤差較大的PPT、LLE、SPE等作為前處理技術(shù)。本課題研究了可

5、使脂溶性蛋白結(jié)合型藥物釋放的技術(shù)，通過脂溶性釋放劑的加入使HFCF-UF法用于脂溶性蛋白結(jié)合型藥物Ct分析成為可能，建立了一種可用于脂溶性蛋白結(jié)合型藥物Ct分析的直接進樣技術(shù)，不僅可為Ct的TDM提供更為簡單、準(zhǔn)確的分析技術(shù)，而且可為PPB分析方法的建立奠定基礎(chǔ)，而相關(guān)研究未見報道。
　　本研究以卡馬西平(CBZ)和苯巴比妥(PB)為例，建立并驗證了一種簡單、準(zhǔn)確、可靠的HFCF-UF法用于脂溶性蛋白結(jié)合型藥物Ct的分析。方法通過

6、考察不同的釋放劑，使其不僅可以使結(jié)合型藥物從藥物-蛋白復(fù)合物上釋放下來，而且可以很好地溶解脂溶性藥物，避免脂溶性藥物的聚集和吸附，從而可以準(zhǔn)確地分析脂溶性蛋白結(jié)合型藥物的Ct。本試驗最終以丙酮作為釋放劑，方法的絕對回收率在100％左右，校正曲線可以在無血漿的標(biāo)準(zhǔn)溶液中建立。結(jié)果證實，HFCF-UF法可用于脂溶性蛋白結(jié)合型藥物Ct的分析，為臨床TDM提供了一個可靠的平臺，并為后續(xù)PPB分析方法的建立奠定了堅實的基礎(chǔ)。眾所周知，游離藥物才是

7、真正起到藥理學(xué)效應(yīng)的部分，TDM中Cf的分析更能反映血藥濃度與藥理效應(yīng)、毒副反應(yīng)的關(guān)系。在樣品前處理過程中不破壞藥物-蛋白結(jié)合平衡是準(zhǔn)確分析Cf的關(guān)鍵因素。離心超濾法(CF-UF)作為Cf分析的“金標(biāo)準(zhǔn)”已廣泛應(yīng)用于Cf的研究。文獻報道CF-UF的超濾液體積極易受到試驗條件及血漿條件的影響，大小各不一致，其過大可能會破壞藥物-蛋白結(jié)合平衡，使Cf分析的準(zhǔn)確度和精密度較差。氨茶堿(ThP)的治療窗較窄，毒副反應(yīng)時常發(fā)生，故ThP的TDM是

8、保證療效和減少毒副反應(yīng)的重要手段。然而，較少文獻報道用CF-UF法分析ThP的Cf，且均未進行完整的方法學(xué)驗證，無法確定方法的準(zhǔn)確性和可靠性。為了保證ThP用藥的安全性及有效性，建立一種準(zhǔn)確、可靠的分析ThP的Cf方法成為TDM亟需的技術(shù)手段。建立了一種準(zhǔn)確、可靠的HFCF-UF法用于ThP的Cf研究，并成功應(yīng)用于ThP的臨床TDM中。方法通過HFCF-UF和CF-UF的交叉試驗考察了兩個方法的準(zhǔn)確度和精密度，并對CF-UF的方法學(xué)進行

9、了全面的驗證。結(jié)果表明兩個方法具有相當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確度，但HFCF-UF的精密度更好，且較少受到實驗條件及血漿條件的影響。因此，HFCF-UF更能準(zhǔn)確地表征血漿中ThP的Cf，并將此方法成功應(yīng)用于臨床TDM中，為ThP的TDM提供了一個準(zhǔn)確、可靠的分析平臺，為后續(xù)PPB分析方法的建立奠定了基礎(chǔ)。不管是Ct還是Cf的TDM，其均為某一時刻的瞬時血藥濃度，極易受到取樣時間的影響，不能反映體內(nèi)藥物的整個情況。而PPB在某一特定患者體內(nèi)，一段病情平穩(wěn)的

10、時間段內(nèi)，幾乎保持恒定，其可反映藥物的整體水平。有文獻報道，白蛋白濃度的改變、合并用藥或藥物代謝產(chǎn)物對相同蛋白結(jié)合位點的競爭對藥物的Cf均具有顯著影響，其根本原因是改變了藥物的PPB導(dǎo)致Cf的改變。因此，PPB的改變是Cf改變的根本，監(jiān)測PPB的變化是從根本上了解Cf的變化水平。此外，不同患者間及患者與健康人間藥物的PPB具有很大差異，用從健康人的體外研究得到的藥物PPB，根據(jù)Ct計算Cf從而指導(dǎo)臨床劑量調(diào)整是不科學(xué)、不準(zhǔn)確的。而且，