PYG02相互作用蛋白的純化鑒定及功能初探.pdf

1、Pygopus(Pygo)是近年來發(fā)現(xiàn)的Wnt信號(hào)通路的新組分。在哺乳動(dòng)物中Pygo有兩個(gè)同源基因：Pygo1和Pygo2，后者的分布較為廣泛。PYGO2蛋白定位于細(xì)胞核內(nèi)，它有兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，分別是位于C-端的PHD鋅指結(jié)構(gòu)域和位于N-端的NHD結(jié)構(gòu)域。PYGO2通過PHD結(jié)構(gòu)域與BCL9和β-catenin構(gòu)成復(fù)合體，共同促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子TCF對(duì)Wnt靶基因的轉(zhuǎn)錄激活。Pygo2NHD結(jié)構(gòu)域的功能尚不明確，有研究者認(rèn)為它具有轉(zhuǎn)錄激活作用。近

2、期研究顯示，在哺乳動(dòng)物中Pygo2可能還介導(dǎo)Wnt非依賴性的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。 串聯(lián)親和純化技術(shù)(TAP)是在目的蛋白一端導(dǎo)入兩個(gè)特異性的蛋白標(biāo)簽，經(jīng)過兩步親和純化，獲得在生理?xiàng)l件下與目的蛋白相互作用的蛋白質(zhì)，隨后用質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行鑒定。它集合了親和純化和免疫共沉淀兩種技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，可以獲得高純度、高濃度的目的蛋白復(fù)合物，簡便快捷。 本研究利用串聯(lián)親和純化和質(zhì)譜聯(lián)用的方法，從穩(wěn)定表達(dá)外源性PYGO2蛋白(帶ProtA和CBP標(biāo)簽)

3、的DLD-1結(jié)腸癌細(xì)胞中，分離得到兩個(gè)與PYGO2相互作用的新蛋白：MED12(Mediatorof RNA polymerase Ⅱ transcription subunit 12)和PIK3C2A(Phosphatidylinositol-4-phosphate 3-kinase C2 domain-containing alphapolypeptide)。進(jìn)一步的免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)，PYGO2通過NHD結(jié)構(gòu)域與MED12結(jié)合。隨