IL-22對角質(zhì)形成細(xì)胞表達(dá)HB-EGF及TIG3作用機(jī)制的研究.pdf

1、銀屑病是臨床常見的慢性易復(fù)發(fā)的紅斑、鱗屑性疾病。本病臨床可分為尋常型、關(guān)節(jié)病型、紅皮病型、膿皰型4個(gè)類型。病程慢性，反復(fù)發(fā)作。其發(fā)病機(jī)理尚未完全明確。目前研究認(rèn)為銀屑病的發(fā)病機(jī)制主要是由輔助性Th細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子介導(dǎo)的以角質(zhì)形成細(xì)胞為靶點(diǎn)的炎癥反應(yīng)。
　　Th22細(xì)胞是新發(fā)現(xiàn)的CD4+輔助性T細(xì)胞亞群，在銀屑病外周血中高表達(dá)，其主要細(xì)胞因子為IL-22。通過其實(shí)現(xiàn)相關(guān)生物學(xué)功能。在銀屑病病人外周血及皮損中IL-22水平和銀屑病

2、的嚴(yán)重程度呈明顯的正相關(guān)。我們的前期研究表明肝素結(jié)合表皮生長因子樣生長因子(heparin-binding epidermal-growth-factor-like growth factor, HB-EGF)在銀屑病表皮KC異常增殖和其轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮重要作用。本課題的前期研究表明 IL-22可以誘導(dǎo)體外培養(yǎng)HaCaT細(xì)胞表達(dá)HB-EGF，但作用機(jī)制未明，絲裂原活化蛋白激酶(MAPK-ERK1/2)通路和轉(zhuǎn)錄激活因子途徑（JAK/STAT）

3、這兩種信號通路在銀屑病發(fā)病機(jī)制中起不可或缺作用。他扎羅汀誘導(dǎo)基因3（Tazarotene-induced gene3, TIG3）是一種腫瘤抑制因子。TIG3可以調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖和分化，在銀屑病表達(dá)降低。
　　綜上所述，我們推測IL-22促 KC分泌HB-EGF可能與MAPK-ERK1/2和JAK/STAT這兩條信號通路有關(guān)，且與TIG3表達(dá)異常存在一定關(guān)系。IL-22通過促進(jìn)HB-EGF表達(dá)，抑制TIG3表達(dá)參與銀屑病發(fā)生

4、、發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)研究IL-22促HaCaT細(xì)胞分泌HB-EGF作用機(jī)制及對HaCaT細(xì)胞分泌TIG3的影響。
　　目的：研究白介素22（Interleukin-22，IL-22）對角質(zhì)形成細(xì)胞表達(dá)HB-EGF的作用機(jī)制和對TIG3表達(dá)影響及作用機(jī)制。
　　方法：
　　1、以不同濃度(12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L)IL-22和PBS作用于HaCaT細(xì)胞24小時(shí)后，提取細(xì)胞總蛋白，用Weste

5、rn blot法檢測IL-22對細(xì)胞MAPK-ERK1/2和JAK/STAT這兩條信號通路的影響；應(yīng)用相關(guān)信號通路阻斷劑PD98059和AG490與IL-22作用于HaCaT細(xì)胞后分別提取干預(yù)后細(xì)胞總蛋白及總mRNA，用Western blot法、ELISA法和實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測其對HaCaT細(xì)胞分泌HB-EGF的影響。應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P<0.05認(rèn)為有顯著性差異。
　

6、　2、應(yīng)用咪喹莫特誘導(dǎo)小鼠背部皮膚產(chǎn)生銀屑病樣皮損，然后皮損處皮下注射1μg IL-22，48h后處死小鼠，取下背部皮膚，HE染色觀察小鼠皮膚的改變，免疫組化觀察HB-EGF的表達(dá)。
　　3、用不同濃度(12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L)IL-22和應(yīng)用相關(guān)信號通路阻斷劑PD98059和AG490與IL-22處理HaCaT細(xì)胞，對照組用等量PBS處理，應(yīng)用免疫熒光法檢測細(xì)胞內(nèi)TIG3蛋白的表達(dá)位置，分別

7、提取干預(yù)后的細(xì)胞總蛋白及總mRNA，用Western blot法、ELISA法和實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測其對HaCaT細(xì)胞分泌TIG3的影響。應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P<0.05認(rèn)為有顯著性差異。
　　結(jié)果：
　　1、IL-22可誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞MAPK信號通路中P-ERK1/2蛋白的增加和JAK2/STAT3信號通路中P-JAK2和P-STAT3蛋白的升高。加入信號通路特異性抑制劑PD9805

8、9及AG490后HB-EGF蛋白和mRNA的表達(dá)較IL-22干預(yù)組明顯降低。
　　2、咪喹莫特持續(xù)作用于Bal B/c小鼠背部，可以成功誘導(dǎo)小鼠銀屑病樣皮損， IL-22皮下注射可引起正常Bal B/c小鼠背部及銀屑病小鼠皮膚表皮中HB-EGF表達(dá)的升高。
　　3、IL-22可引起HaCaT細(xì)胞中TIG3蛋白水平的降低，其作用的強(qiáng)度與濃度有關(guān)：不同濃度IL-22處理組的細(xì)胞分泌TIG3的量均較對照組降低，且隨著IL-22濃度

9、的升高，其對TIG3表達(dá)的抑制作用逐漸增強(qiáng)。應(yīng)用信號通路特異性抑制劑PD98059及AG490后IL-22對TIG3抑制作用較IL-22組減少。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：IL-22可以引起HaCaT細(xì)胞中MAPK-ERK1/2和JAK2/STAT3這兩條信號通路激活。IL-22誘導(dǎo) HaCaT細(xì)胞產(chǎn)生 HB-EGF蛋白的作用機(jī)制可能與MAPK-ERK1/2和JAK2/STAT3這兩條信號通路有關(guān)。IL-22可引起B(yǎng)al B/c