DLX1聯(lián)合BMP9促進(jìn)人骨肉瘤細(xì)胞成骨分化的研究.pdf

1、第一部分 DLX1過表達(dá)對人骨肉瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為及成骨分化的影響
　　目的：
　　探討DLX1過表達(dá)對人骨肉瘤細(xì)胞MG63惡性生物學(xué)行為及成骨分化的影響。
　　方法：
　　采用構(gòu)建有DLX1基因的重組腺病毒（adenovirus，Ad）AdDLX1和空載腺病毒AdRFP，分別感染人骨肉瘤細(xì)胞MG63，分為DLX1實(shí)驗(yàn)組（AdDLX1感染組）和RFP對照組（AdRFP感染組），觀察細(xì)胞熒光表達(dá)情況并以 RT-P

2、CR和 Western blot驗(yàn)證 DLX1的表達(dá)情況；Transwell實(shí)驗(yàn)檢測 MG63細(xì)胞遷移和侵襲；DAPI染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測 MG63細(xì)胞凋亡；CCK-8檢測 MG63細(xì)胞增殖；堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）染色和ALP讀數(shù)分析MG63細(xì)胞早期成骨能力，Western blot檢測骨橋蛋白（osteopontin，OPN）的蛋白表達(dá)，茜素紅染色檢測細(xì)胞晚期成骨能力；RT-PCR初篩相關(guān)信號通

3、路，Western blot驗(yàn)證初篩陽性信號分子的蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1. AdDLX1和AdRFP分別感染MG63細(xì)胞后，與RFP對照組相比，AdDLX1能顯著增加骨肉瘤細(xì)胞MG63中DLX1的表達(dá)。
　　2. MG63細(xì)胞中DLX1過表達(dá)后，與RFP對照組相比，細(xì)胞遷移能力和侵襲能力下降。
　　3. MG63細(xì)胞中DLX1過表達(dá)后，與RFP對照組相比，過表達(dá)DLX1對細(xì)胞增殖、凋亡無明顯影響。

4、r>　　4. MG63細(xì)胞中DLX1過表達(dá)后，與RFP對照組相比，過表達(dá)DLX1對細(xì)胞成骨分化無明顯影響。
　　5. MG63細(xì)胞中DLX1過表達(dá)后，與RFP對照組相比，DLX1過表達(dá)可上調(diào)β-catenin mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1. MG63細(xì)胞中DLX1過表達(dá)后，對MG63細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為有不同程度的影響：可抑制MG63細(xì)胞的遷移和侵襲，對MG63細(xì)胞的增殖和凋亡無顯著影響；對MG63細(xì)胞成

5、骨分化無明顯促進(jìn)作用。
　　2. DLX1在MG63細(xì)胞中過表達(dá)后，Wnt/β-catenin信號通路參與DLX1對MG63細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)控。
　　第二部分 DLX1聯(lián)合BMP9對人骨肉瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為及成骨分化的影響
　　目的：
　　探討DLX1聯(lián)合BMP9對人骨肉瘤細(xì)胞MG63惡性生物學(xué)行為及成骨分化的影響。
　　方法：
　　采用構(gòu)建有 DLX1和 BMP9基因的重組腺病毒 AdDLX1和

6、AdBMP9，單獨(dú)或聯(lián)合感染人骨肉瘤MG63細(xì)胞，分為RFP組（AdRFP感染組）、BMP9組（AdBMP9+AdRFP感染組）、DLX1+BMP9組（AdDLX1+AdBMP9感染組）、DLX1組（AdDLX1+AdGFP感染組），觀察細(xì)胞熒光表達(dá)情況并以RT-PCR和Western blot驗(yàn)證DLX1、BMP9 mRNA和蛋白表達(dá)情況；Transwell實(shí)驗(yàn)檢測MG63細(xì)胞遷移和侵襲；DAPI染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測MG63細(xì)胞凋亡；

7、CCK-8檢測MG63細(xì)胞增殖；ALP染色和 ALP讀數(shù)分析細(xì)胞早期成骨能力，Western blot檢測骨橋蛋白（osteopontin，OPN）的蛋白表達(dá)，茜素紅染色檢測細(xì)胞晚期成骨能力；采用RT-PCR初篩相關(guān)信號通路，Western blot驗(yàn)證初篩陽性信號分子的蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1. AdDLX1單獨(dú)感染MG63細(xì)胞后，細(xì)胞中DLX1的 mRNA和蛋白表達(dá)上調(diào)；AdBMP9單獨(dú)感染MG63細(xì)胞后，細(xì)胞

8、中BMP9的 mRNA和蛋白表達(dá)上調(diào)；AdDLX1和AdBMP9聯(lián)合感染MG63細(xì)胞后，細(xì)胞中DLX1、BMP9的mRNA和蛋白表達(dá)均上調(diào)。
　　2.與RFP組相比，BMP9組、DLX1+BMP9組、DLX1組中MG63細(xì)胞遷移和侵襲能力均下降，且DLX1+BMP9組對遷移和侵襲能力的抑制較BMP9組和DLX1組有所增加。
　　3.與RFP組相比，BMP9組、DLX1+BMP9組中MG63細(xì)胞增殖能力均下降，且兩組 MG63

9、細(xì)胞受到的增殖抑制無明顯差異；DLX1組細(xì)胞增殖較RFP組無明顯差異。
　　4.與RFP組相比，BMP9組、DLX1+BMP9組、DLX1組中MG63細(xì)胞凋亡無明顯差異。
　　5.與RFP組相比，BMP9組中MG63細(xì)胞ALP活性、OPN蛋白表達(dá)和鈣鹽沉積有所增加，但增加程度有限；DLX1+BMP9組中MG63細(xì)胞ALP活性增強(qiáng)、OPN蛋白表達(dá)上調(diào)、鈣鹽沉積明顯增加；DLX1組中MG63細(xì)胞ALP活性、OPN蛋白表達(dá)和鈣鹽沉

10、積無明顯增加。
　　結(jié)論：
　　1. DLX1單獨(dú)作用于人骨肉瘤細(xì)胞MG63時(shí)，可抑制MG63細(xì)胞遷移和侵襲，對 MG63細(xì)胞凋亡和增殖無明顯影響；不能促進(jìn) MG63細(xì)胞成骨分化。
　　2. BMP9單獨(dú)作用于人骨肉瘤細(xì)胞MG63時(shí)，可抑制MG63細(xì)胞遷移、侵襲和增殖，對MG63細(xì)胞凋亡無明顯影響；對MG63細(xì)胞成骨分化的促進(jìn)作用較弱。
　　3. DLX1與BMP9聯(lián)合作用后，可抑制MG63細(xì)胞遷移、侵襲和增殖，