小鼠精原干細(xì)胞分離富集和培養(yǎng).pdf

1、目的：成年小鼠睪丸中約有108個(gè)細(xì)胞，其中約有 2×104個(gè)是精原干細(xì)胞，僅占睪丸生精上皮細(xì)胞總數(shù)的 0.02～0.03％,精原干細(xì)胞數(shù)量太少不利于體外培養(yǎng)。分離和富集精原干細(xì)胞成為精原干細(xì)胞體外培養(yǎng)能否成功的前提條件。尋找分離和富集小鼠精原干細(xì)胞有效方法。 方法：出生6-8天小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，先用0.25％胰酶1mM　EDTA消化睪丸10min,用胎牛血清終止消化，用一次40-um孔徑的濾器過慮制成單細(xì)胞懸液，30％percol

2、l不連續(xù)密度梯度法離心富集精原干細(xì)胞，再根椐未分化精原干細(xì)胞表面thy1.2(CD90.2)陽性CD117(c-kit)陰性特點(diǎn)用流式細(xì)胞儀將精原干細(xì)胞分選出來，并在體外進(jìn)行培養(yǎng)嘗試。 結(jié)果：30％percoll密度梯度離心前CD117(c-kit)陽性細(xì)胞占13.80±3.34％,CD90.2陽性細(xì)胞占28.98±4.51％,二者都陽性細(xì)胞占8.98±2.98％，CD117陰性CD90.2陽性細(xì)胞占18.36±2.67％;離心

3、后 CD117(c-kit)陽性細(xì)胞占12.37±3.34％,CD90.2陽性細(xì)胞占56.98±4.51％,二者都陽性細(xì)胞占8.20±3.98％，CD117陰性CD90.2陽性細(xì)胞占32.36±3.67％；CD117(c-kit)陽性細(xì)胞和二者都陽性細(xì)胞所占百分比前后比較差異無顯著性(P>0.1)，CD90.2陽性細(xì)胞和CD117陰性和CD90.2陽性細(xì)胞所占百分比前后比較差異有顯著性(P<0.05);采用CD117和CD90.2作為標(biāo)