載淋球菌PorB基因殼聚糖納米粒的制備及其誘導(dǎo)小鼠的免疫應(yīng)答.pdf

1、目的:以殼聚糖為基質(zhì)材料,制備淋球菌porB基因緩釋微球,通過(guò)鼻黏膜途徑及肌注途徑免疫BALB/c小鼠,分析其免疫活性,探討其能否增強(qiáng)特異性體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答水平,為殼聚糖納米粒作為淋球菌DNA疫苗載體的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:采用復(fù)凝聚法制備CS-pcDNA3.1(-)/porB微球,分別用透射電鏡,激光粒度分析儀觀察微球形態(tài)、大小、zeta電位;核酸酶研究其保護(hù)性; DNA電泳阻滯分析CS-pcDNA3.1(-)/p

2、orB納米粒結(jié)合能力;釋放實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)CS-pcDNA3.1(-)/porB的穩(wěn)定性;用MTT法評(píng)價(jià)CS-pcDNA3.1(-)/porB的細(xì)胞毒性高低。將殼聚糖-pcDNA3.1(-)/porB納米粒和裸質(zhì)粒pcDNA3.1(-)/porB納米粒通過(guò)鼻飼和肌注途徑免疫雌性BALB/c小鼠,ELISA法測(cè)定小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答水平。
　　結(jié)果:
　　(1)殼聚糖與 pcDNA3.1(-)/porB質(zhì)粒形成穩(wěn)定的微球,包封率

3、大于90％,多數(shù)成球形,直徑在100-300nm之間。
　　(2)殼聚糖納米粒能有效抵抗核酸酶的降解作用,4℃保存45d,殼聚糖納米粒仍能較穩(wěn)定地和porB質(zhì)粒結(jié)合。MTT毒性試驗(yàn)證明殼聚糖-pcDNA3.1(-)/porB納米粒在高劑量才出現(xiàn)低細(xì)胞毒性。
　　(3) CS-pcDNA3.1(-)/porB與裸質(zhì)粒 pcDNA3.1(-)/porB組通過(guò)鼻黏膜免疫及肌肉注射免疫均能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答。CS-pcDNA

4、3.1(-)/porB誘導(dǎo)的血清特異性IgG和生殖道灌洗液特異性sIgA抗體水平隨免疫時(shí)間呈上升趨勢(shì),與裸質(zhì)粒pcDNA3.1(-)/porB組相比差異顯著(P<0.05),同時(shí)CS-pcDNA3.1(-)/porB鼻飼和肌注免疫組小鼠脾淋巴細(xì)胞經(jīng)特異性抗原刺激后,脾淋巴細(xì)胞誘生的IFN-γ和IL-4含量明顯升高,與裸質(zhì)粒pcDNA3.1(-)/porB組、PBS和殼聚糖對(duì)照組之間差異具有顯著性(P<0.01);脾淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)(分別

5、為1.54±0.28和1.63±0.27)明顯高于裸質(zhì)粒 pcDNA3.1(-)/porB組、殼聚糖組和PBS組(P<0.05);鼻飼途徑的CS-pcDNA3.1(-)/porB組、裸質(zhì)粒pcDNA3.1(-)/porB組血清 IgG亞類 IgG2a/IgG1比值分別為1.441、1.745,肌注途徑的CS-pcDNA3.1(-)/porB組、裸質(zhì)粒pcDNA3.1(-)/porB組血清IgG亞類IgG2a/IgG1比值分別為1.387