兔同種異體骨異位再血管化的實驗研究.pdf

1、背景：
　　在機械、工業(yè)、交通日漸發(fā)達的今天，各種高能量損傷越來越多，程度越來越復(fù)雜。小腿開放性粉碎骨折發(fā)生率最高，術(shù)后骨感染率較高，且易轉(zhuǎn)化為慢性骨感染[1]。徹底去除感染骨段及其周圍病灶是控制感染的重要手段，但可能造成骨缺損甚至大段骨缺損，且控制局部創(chuàng)面感染往往還需經(jīng)過漫長的治療過程。創(chuàng)傷后感染性大段骨缺損是骨科難題，同種異體骨用于感染性大段骨缺損的修復(fù)尚未見報道，能否將其用于感染性大段骨缺損的治療？我們設(shè)想將同種異體骨段置于

2、體內(nèi)血供豐富的部位，使其完成再血管化，待創(chuàng)面感染徹底控制后，再將其帶血管蒂的血管化同種異體骨段移植修復(fù)骨缺損。
　　目的：
　　以中國白兔為實驗對象，將制備好的同種異體骨段置于兔血運豐富的隱動脈處，探索其完成再血管化的時間。
　　方法：
　　3.1、同種異體骨的制備
　　選取10只中國白兔，空氣栓塞耳緣靜脈殺死白兔，按照無菌手術(shù)的方法取出兔脛骨，把周圍的肌肉及骨膜剔除，截成1.5cm長度的骨段，把骨髓組織用

3、小刮匙徹底刮除，用無菌生理鹽水清洗干凈，浸泡于10％的慶大霉素中30分鐘，用滅菌好的雙層血漿袋密封包裝，經(jīng)過輻照滅菌后，放入冰箱4°冷藏12h，-30°冷凍12h，在-80°的深低溫冰箱3周后使用，可以去除更多的抗原。
　　3.2、同種異體骨再血管化
　　以健康成年中國白兔為研究對象。把60只白兔按隨機數(shù)字表法隨機分為兩組，其中實驗組和對照組各30只。實驗組把已經(jīng)準(zhǔn)備好的長1.5cm的異體骨段放置在兔大腿股直肌和股內(nèi)側(cè)間隙隱

4、動脈處，用1.0mm克氏針把骨段固定在股骨內(nèi)側(cè)，對照組為自體的脛骨段，長度和實驗方法與實驗組相同，術(shù)后4周，8周，12周分別從肉眼大體標(biāo)本觀察、免疫組化切片檢測血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vascularendothelial growth factor, VEGF)和血管內(nèi)皮細(xì)胞中CD34蛋白表達，行統(tǒng)計學(xué)處理。
　　結(jié)果：
　　實驗組和對照組部分兔手術(shù)部位感染，不包括在統(tǒng)計標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)，補充空缺。VEGF以新生的、未成熟的血管周圍，

5、軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞以及未分化的間葉細(xì)胞周圍最多，術(shù)后4、12周，VEGF的表達量實驗組和對照組比較無差異，8周，與對照組相比，實驗組VEGF的表達有顯著統(tǒng)計學(xué)差異，兩組縱向比較，8周多于4、12周。CD34蛋白以哈弗管周圍的血管內(nèi)皮細(xì)胞中最明顯。術(shù)后4周，CD34陽性血管兩組比較有顯著差異，8、12周，實驗組與對照組比較，無顯著差異。實驗組和對照組CD34陽性血管8周多于4、12周。
　　術(shù)后4周，實驗組和對照組都有較少的纖維組織