肺炎鏈球菌腦膜炎大鼠腦組織AQP4和occludin的表達(dá)及地塞米松的干預(yù)影響.pdf

1、前言：
　　細(xì)菌性腦膜炎是嬰幼兒常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病，致死致殘率高，嚴(yán)重影響患兒生命健康。最常見(jiàn)的致病菌是腦膜炎雙球菌、肺炎鏈球菌和B型流感嗜血桿菌。腦水腫導(dǎo)致的顱內(nèi)壓增高是細(xì)菌性腦膜炎患兒不良結(jié)局的一個(gè)重要因素，其發(fā)生機(jī)制復(fù)雜。血腦屏障通透性的改變是導(dǎo)致腦水腫的重要因素。緊密連接是血腦屏障的重要結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，occludin是緊密連接中最重要的跨膜蛋白質(zhì)之一，對(duì)BBB的維持起重要作用。水通道蛋白-4（aquaporin-4，

2、AQP4）是腦組織中表達(dá)最高的水通道蛋白，其表達(dá)變化直接影響血腦屏障通透性，目前已成為分子水平研究腦水腫發(fā)生機(jī)制的熱點(diǎn)問(wèn)題。血腦屏障與AQP4、occludin的關(guān)系提示治療血腦屏障異常引起的疾病可以從影響相應(yīng)蛋白入手。目前細(xì)菌性腦膜炎時(shí)腦組織不同時(shí)相AQP4、occludin表達(dá)如何？地塞米松治療是否對(duì)其產(chǎn)生影響？尚不清楚。
　　目的：
　　建立肺炎鏈球菌腦膜炎動(dòng)物模型，探討肺炎鏈球菌腦膜炎大鼠腦組織AQP4、occlud

3、in不同時(shí)相的表達(dá)變化及地塞米松干預(yù)對(duì)其的影響。
　　材料與方法：
　　1.腦膜炎模型大鼠制備
　　采用肺炎鏈球菌菌株和等量的生理鹽水腦池內(nèi)注射，建立3周齡大鼠細(xì)菌性腦膜炎模型和正常對(duì)照模型.
　　2.40只清潔級(jí)3周齡SD大鼠隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、感染后24h組、48h組和5d組。
　　3.另取40只清潔級(jí)3周齡SD大鼠隨機(jī)分成4組：生理鹽水對(duì)照組、腦膜炎模型未治組、頭孢曲松治療模型組、頭孢曲松加地塞米

4、松治療模型組。
　　4.各組動(dòng)物在規(guī)定的時(shí)間處死，斷頭取腦，其中一半干濕重法稱(chēng)重，一半多聚甲醛固定，常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋。
　　5.應(yīng)用S-P免疫組織化學(xué)法和Western blot法分別檢測(cè)水孔蛋白AQP4和緊密連接蛋白Occludin的表達(dá)變化。
　　6.原位雜交檢測(cè)各組腦組織AQP4mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.成功制備肺炎鏈球菌腦膜炎大鼠模型。
　　2.鏈球菌感染后48h腦組織水

5、腫程度最重。48h組與24h組、5d組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；
　　3.鏈球菌感染大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)后，腦組織中AQP4及AQP4mRNA表達(dá)24 h開(kāi)始上升，48 h達(dá)峰值，5d時(shí)降低，但仍高于生理鹽水對(duì)照組，各組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；腦組織含水量與 AQP4表達(dá)之間呈顯著正相關(guān)， r=0.864，P<0.01。
　　4.鏈球菌感染大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)后，腦組織中Occludin表達(dá)24 h開(kāi)始降低，

6、48 h達(dá)峰值，5d時(shí)開(kāi)始升高，但仍低于生理鹽水對(duì)照組，各組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；
　　5.地塞米松加頭孢曲松治療組AQP4及AQP4mRNA表達(dá)低于單用頭孢曲松治療組(P<0.05)，與生理鹽水對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；
　　6.地塞米松加頭孢曲松治療組Occludin蛋白表達(dá)高于單用頭孢曲松治療組(P<0.05)，與生理鹽水對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：