基于核酸擴(kuò)增的硫酸鹽還原菌分子診斷研究.pdf

1、金屬材料在腐蝕過(guò)程中受到微生物腐蝕的影響，硫酸鹽還原菌（SRB）是一種能促進(jìn)金屬腐蝕的微生物。本文旨在通過(guò)以硫酸鹽還原菌厭氧培養(yǎng)體系的建立為基礎(chǔ)，在成功培養(yǎng) SRB菌株的前提下，利用兩種核酸擴(kuò)增技術(shù)——聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）和重組酶聚合酶擴(kuò)增反應(yīng)（RPA）建立快速檢測(cè)SRB菌株的方法。
　　通過(guò)以厭氧操作箱和厭氧培養(yǎng)盒為主的厭氧培養(yǎng)方法，培養(yǎng)了購(gòu)自中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心的Desulfovibrio fructosivor

2、ans（Df，菌株編號(hào)3468）和獲贈(zèng)于中國(guó)科學(xué)院海洋研究所的Desulfovibrio vulgaris（Dv），Desulfovibrio caledoniensis（Dc）及7株采集分離后未鑒定的硫酸鹽還原菌。分別以硫酸鹽還原菌16s rDNA中的特異性保守片段和SRB特異性基因異化亞硫酸鹽還原酶（DSR）、腺苷酰硫酸還原酶（APS）為模板設(shè)計(jì)了11對(duì)引物。通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）以標(biāo)準(zhǔn)菌株Desulfovibrio cale

3、doniensis（Dc）基因組DNA為模板驗(yàn)證引物的有效性并用多種SRB菌株以及大腸桿菌DH5α基因組DNA為模板驗(yàn)證引物的特異性，找到了2對(duì)能夠特異性擴(kuò)增部分SRB基因組DNA的引物。在PCR驗(yàn)證的2對(duì)特異性引物的基礎(chǔ)上，初步探索了利用重組酶聚合酶擴(kuò)增反應(yīng)（RPA）檢測(cè)SRB的方法，設(shè)計(jì)了4對(duì)RPA引物，經(jīng)過(guò)驗(yàn)證沒(méi)有獲得特異性檢測(cè)SRB的引物，但發(fā)現(xiàn)其中一對(duì)引物可用于PCR方法檢測(cè)SRB，為將來(lái)優(yōu)化RPA反應(yīng)體系及引物設(shè)計(jì)提供了重要