中國鹵蟲orthodenticle和Hunchback基因的序列分析及在不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá).pdf

1、中國鹵蟲(Artemia sinica)屬于節(jié)肢動(dòng)物門(Phylum Arthropoda)，甲殼綱(ClassCrustacea)，鰓足亞綱(Subclass Branchiopoda)，無甲目(Order Anostaca)，鹵蟲科(FamilyArtemiidae)，鹵蟲屬(Genus Artemia)。主要分布于我國的山西、西藏、新疆、青海、內(nèi)蒙等地。對(duì)于鹵蟲的研究我國起步較晚，從80年代初至今在形態(tài)學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、生態(tài)學(xué)、資源

2、生物學(xué)、遺傳學(xué)等學(xué)科的鹵蟲研究已有報(bào)道。但關(guān)于中國鹵蟲(Artemia sinica)早期發(fā)育過程中基因表達(dá)的研究很少，還有待于進(jìn)一步深入細(xì)致的研究和分析。本文根據(jù)Genbank上美國鹵蟲orthodenticle、Hunchback基因序列設(shè)計(jì)引物，以中國鹵蟲總RNA為模板，經(jīng)RT-PCR，分別得到了長(zhǎng)121bp、376bp的基因片段，經(jīng)Blastn比對(duì)、Clustal X1.83和MEGA4.0軟件對(duì)該序列的假定氨基酸序列和相近蛋白

3、的氨基酸序列進(jìn)行分子進(jìn)化分析，確認(rèn)該序列是中國鹵蟲orthodenticle、Hunchback基因的部分序列，并根據(jù)這部分序列設(shè)計(jì)了RCAE引物。并且首次得到了orthodenticle，Hunchback基因的序列全長(zhǎng)。使用在線分析軟件對(duì)orthodenticle、Hunchback基因的假定蛋白的氨基酸序列進(jìn)行了分析和功能預(yù)測(cè)。使用整體免疫組化的方法首次確定了orthodenticle、Hunchback基因在中國鹵蟲不同發(fā)育時(shí)期

4、的表達(dá)部位。并通過半定量PCR粗略的鑒定了orthodenticle、Hunchback基因在中國鹵蟲不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)量。orthodenticle、Hunchback基因都在中國鹵蟲的胚胎時(shí)期進(jìn)行表達(dá)。orthodenticle基因在頭部、胸部和軀干部都有表達(dá)。Hunchback基因在擬成蟲期的頭部、胸部、尾部肛門處以及附肢上都有表達(dá)。orthodenticle、Hunchback基因的表達(dá)量都隨著中國鹵蟲的不斷發(fā)育呈現(xiàn)了遞減的趨勢(shì)