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文檔簡介
1、目的:
本研究以我國常用的豬型減毒活疫苗 S2株作為實(shí)驗(yàn)菌株,通過體外細(xì)胞共培養(yǎng)體系,研究S2株感染后對巨噬細(xì)胞的激活、對T細(xì)胞的激活以及S2感染后死亡的巨噬細(xì)胞對樹突狀細(xì)胞的活化和誘導(dǎo) T細(xì)胞應(yīng)答的檢測,進(jìn)一步闡明巨噬細(xì)胞啟動(dòng)抗布魯菌S2的細(xì)胞免疫應(yīng)答的途徑。
方法:
1.以布魯菌S2株體外感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,并以未感染的正常細(xì)胞作為對照,感染后分別于24h、48h、72h后,ELISA法檢測細(xì)胞上清中
2、IL-12、TNF-α水平;
2.正常巨噬細(xì)胞與T細(xì)胞共培養(yǎng)和S2菌感染后的巨噬細(xì)胞與T細(xì)胞共培養(yǎng),分別于共培養(yǎng)后的24h、48h和72h,ELISA法檢測各組上清中IFN-γ和IL-4水平;
3. MΦ分為正常對照組和S2感染組,用不含血清的RPMI1640培養(yǎng)液饑餓培養(yǎng),待MΦ全部死亡與DC共培養(yǎng),并設(shè)單純DC對照組,ELISA法檢測培養(yǎng)上清中IL-12、TNF-α。另取取沉淀的樹突狀細(xì)胞計(jì)數(shù),與T細(xì)胞按比例共培
3、養(yǎng),分別于24h、48h、72 h ELISA法檢測IFN-γ、IL-4含量。
結(jié)果:
1. S2菌株感染MΦ后各時(shí)間點(diǎn)培養(yǎng)上清中TNF-α和IL-12均明顯高于正常對照組(p<0.01);
2. S2菌株感染后的巨噬細(xì)胞與T細(xì)胞共培養(yǎng)后,在檢測的各時(shí)間點(diǎn)共培養(yǎng)細(xì)胞上清中IFN-γ均高于正常對照組(P<0.05),但S2菌株感染后巨噬細(xì)胞與T細(xì)胞共培養(yǎng)上清中IL-4分泌與正常組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05
4、);
3.正常饑餓死亡的MΦ和S2株感染后死亡的MΦ與DC共培養(yǎng)組的TNF–α均明顯高于正常DC組TNF–α的分泌水平(P<0.05),而S2株感染后死亡的MΦ與DC共培養(yǎng)組TNF–α又明顯高于正常饑餓死亡的MΦ與DC共培養(yǎng)組(P<0.05),各時(shí)間點(diǎn)均未檢測到IL-12分泌;
4.正常死亡 MΦ+DC+T組和S2感染死亡的MΦ+DC+T組上清中IFN-γ的水平均明顯增高(P<0.05),而各時(shí)間點(diǎn)S2感染的MΦ+D
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