巨噬細(xì)胞可通過直接和交叉途徑啟動(dòng)抗布魯菌S2的細(xì)胞免疫應(yīng)答.pdf

1、目的：
　　本研究以我國常用的豬型減毒活疫苗 S2株作為實(shí)驗(yàn)菌株，通過體外細(xì)胞共培養(yǎng)體系，研究S2株感染后對巨噬細(xì)胞的激活、對T細(xì)胞的激活以及S2感染后死亡的巨噬細(xì)胞對樹突狀細(xì)胞的活化和誘導(dǎo) T細(xì)胞應(yīng)答的檢測，進(jìn)一步闡明巨噬細(xì)胞啟動(dòng)抗布魯菌S2的細(xì)胞免疫應(yīng)答的途徑。
　　方法：
　　1.以布魯菌S2株體外感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，并以未感染的正常細(xì)胞作為對照，感染后分別于24h、48h、72h后，ELISA法檢測細(xì)胞上清中

2、IL-12、TNF-α水平；
　　2.正常巨噬細(xì)胞與T細(xì)胞共培養(yǎng)和S2菌感染后的巨噬細(xì)胞與T細(xì)胞共培養(yǎng)，分別于共培養(yǎng)后的24h、48h和72h，ELISA法檢測各組上清中IFN-γ和IL-4水平；
　　3. MΦ分為正常對照組和S2感染組，用不含血清的RPMI1640培養(yǎng)液饑餓培養(yǎng)，待MΦ全部死亡與DC共培養(yǎng)，并設(shè)單純DC對照組，ELISA法檢測培養(yǎng)上清中IL-12、TNF-α。另取取沉淀的樹突狀細(xì)胞計(jì)數(shù)，與T細(xì)胞按比例共培

3、養(yǎng)，分別于24h、48h、72 h ELISA法檢測IFN-γ、IL-4含量。
　　結(jié)果：
　　1. S2菌株感染MΦ后各時(shí)間點(diǎn)培養(yǎng)上清中TNF-α和IL-12均明顯高于正常對照組(p<0.01)；
　　2. S2菌株感染后的巨噬細(xì)胞與T細(xì)胞共培養(yǎng)后，在檢測的各時(shí)間點(diǎn)共培養(yǎng)細(xì)胞上清中IFN-γ均高于正常對照組(P<0.05)，但S2菌株感染后巨噬細(xì)胞與T細(xì)胞共培養(yǎng)上清中IL-4分泌與正常組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05

4、)；
　　3.正常饑餓死亡的MΦ和S2株感染后死亡的MΦ與DC共培養(yǎng)組的TNF–α均明顯高于正常DC組TNF–α的分泌水平(P<0.05)，而S2株感染后死亡的MΦ與DC共培養(yǎng)組TNF–α又明顯高于正常饑餓死亡的MΦ與DC共培養(yǎng)組(P<0.05)，各時(shí)間點(diǎn)均未檢測到IL-12分泌；
　　4.正常死亡 MΦ+DC+T組和S2感染死亡的MΦ+DC+T組上清中IFN-γ的水平均明顯增高(P<0.05)，而各時(shí)間點(diǎn)S2感染的MΦ+D