不同成熟時期人卵母細(xì)胞冷凍保存的初步研究.pdf

1、目的： 本研究通過對處于不同成熟時期卵子慢凍速融，應(yīng)用偏振光顯微鏡(polarizedlightmicroscopy，Polscope)非侵入性的觀察紡錘體的變化，以及復(fù)蘇后卵子發(fā)育潛能研究，旨在為建立一種安全、有效的卵子冷凍保存與復(fù)蘇方法提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 方法： 不同成熟時期人卵母細(xì)胞采集自體外受精一胚胎移植(invitrofertilization-embryotransfer，IVF-ET)和卵胞漿

2、內(nèi)單精子顯微注射(intracytoplasmicsperminjection，ICSI)治療周期的不育患者周期治療中剩余的未成熟卵子(GV期和MI期)。 實(shí)驗(yàn)分組：對照組(n=56)，直接將未成熟卵子進(jìn)行體外成熟培養(yǎng)(invitromaturation，IVM)，進(jìn)行紡錘體觀察，并行ICSI；MII卵凍融組(n=73)，先將GV期和MI期卵子體外成熟培養(yǎng)到MII期進(jìn)行凍融，將存活的卵子進(jìn)行紡錘體觀察，并行ICSI；MI／GV凍

3、融組(n=91)，將GV期和MI期卵子冷凍，凍融后復(fù)蘇的卵子進(jìn)行體外成熟培養(yǎng)，成熟的卵子進(jìn)行紡錘體觀察，并行ICSI。 用慢凍速融的方法對成熟卵子和未成熟卵子進(jìn)行冷凍和解凍，觀察凍融對卵子體外成熟能力的影響；不同成熟時期卵子的復(fù)蘇情況；應(yīng)用Polscope對卵子的紡錘體進(jìn)行觀察，了解凍融對卵子紡錘體的影響；不同成熟時期卵子的受精及發(fā)育潛能。 結(jié)果： 1、對照組卵的體外成熟率為78．6％，MII卵凍融組卵的體外成熟

4、率為79．4％，MI／GV卵凍融組的卵體外成熟率為60．9％，對照組與MI／GV卵凍融組有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0．05)，冷凍后未成熟卵的體外成熟率下降；MI期卵與GV期卵的體外成熟率(74．8％；71．4％)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0．05)，MI期卵與GV期卵在體外具有相似的成熟能力。 2、MII卵凍融后的復(fù)蘇率為67．6％，MI／GV卵總復(fù)蘇率為71．9％，MI期卵復(fù)蘇率為72．7％，GV期卵為70．6％。MII期卵、MI期卵

5、和GV期卵復(fù)蘇率相似，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0．05)。 3、對照組紡錘體可見率77．3％，明顯高于MII卵凍融組、MI／GV卵凍融組(56.3％；53．8％，P<0．05)，冷凍造成了紡錘體的損傷。MII卵凍融后的紡錘體可見率(56.3％)與凍融MI期和GV期卵子成熟后的紡錘體可見率(52．0％；57．1％)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0．05)，凍融MI期和GV期卵子并沒有減少對紡錘體的影響。 4、對照組的受精率(81．8％)明顯

6、高于MII卵凍融組、MI／GV卵凍融組(62．5％；59．0％，P<0．05)，冷凍后的卵子受精能力受到損害；對照組的卵裂率與MII卵凍融組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(83．3％；733％，P>0．05)，M11卵冷凍組的卵裂沒有受到明顯影響；對照組的卵裂率與MI／GV卵凍融組有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(83．3％；56．5％，P<0．05)，MI／GV卵凍融后卵裂率明顯下降。 5、對照組的異常受精率為9．1％，M11卵凍融組與MI／GV卵凍融組的

7、異常受精率有所增高(16．7％；15．4％)，但與對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0．05)。 6、對照組優(yōu)質(zhì)胚胎率為19．4％，兩個冷凍組沒有優(yōu)質(zhì)胚胎。結(jié)論： 1、超排卵周期中獲得的未成熟卵無論是先冷凍再體外成熟，還是先體外成熟后再冷凍，都具有受精和發(fā)育成早期胚胎的能力。 2、凍融對卵的體外成熟能力造成了影響。 3、減數(shù)分裂紡錘體可見率在兩個凍融組卵都顯著降低，凍融對成熟卵和未成熟卵的細(xì)胞骨架都造成了一定的