中國肝移植患者霉酚酸藥動(dòng)學(xué)及其代謝物腸肝循環(huán)研究.pdf

1、霉酚酸(mycophenolic acid，MPA)是免疫抑制治療方案的重要組成部分，廣泛應(yīng)用于腎、肝臟和心臟的移植后免疫抑制治療。本研究測(cè)定MPA及體內(nèi)代謝物濃度，研究肝移植患者服用麥考酚鈉腸溶片(enteric-coated mycophenolate sodium，EC-MPS)后的藥動(dòng)學(xué)過程及轉(zhuǎn)運(yùn)體基因多態(tài)性對(duì)藥動(dòng)學(xué)影響。同時(shí)運(yùn)用動(dòng)物模型，研究MPA在大鼠體內(nèi)的腸肝循環(huán)(entero hepatic circulation，EH

2、C)過程，進(jìn)一步為提高移植患者M(jìn)PA個(gè)體化治療水平奠定理論基礎(chǔ)。
　　本研究首先建立了LC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定生物樣本中 MPA及其代謝物7-O-葡糖苷酸MPA(7-O-glucuronide conjugate of MPA，MPAG)、?；咸烟侨┧岽x物(acyl glucuronide of MPA，AcMPAG)濃度。100μl人/大鼠血漿及大鼠膽汁稀釋液樣本加入300μl含內(nèi)標(biāo)吲哚美辛的乙腈沉淀，離心后取上清液進(jìn)樣。

3、采用甲酸銨水溶液-甲醇為流動(dòng)相，采用梯度洗脫的方法，流速0.3 mLμmin-1。用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)進(jìn)行定量，電噴霧離子化源（ESI）負(fù)離子方式進(jìn)行檢測(cè)，定量離子對(duì)分別為 m/z319.1→274.9(MPA)、m/z495.3→174.4(MPAG與 AcMPAG)與 m/z356.1→312.0(內(nèi)標(biāo)吲哚美辛)。結(jié)果人/大鼠血漿中 MPA在0.10~50.5μgμmL-1，MPAG在1.13~450μgmL-1，AcMPAG在0.11~2

4、2.4μgμmL-1測(cè)定范圍內(nèi)線性良好(r2>0.99)；大鼠膽汁中MPA在0.02~20.2μgμmL-1，MPAG在0.12~112.5μgμmL-1，AcMPAG在0.028~22.4μgμmL-1范圍內(nèi)線性良好(r2>0.99)；測(cè)量準(zhǔn)確度、精密度符合生物樣品的分析要求，CV均小于15％；MPA及代謝物 MPAG、AcMPAG的提取回收率分別為73.3%~87.7%，77.3%~88.2%，72.3%~84.4%；基質(zhì)效應(yīng)分別為

5、74.6%~83.5%，77.6%~85.1%，80.2%~83.6%。本研究所建立的方法專屬性強(qiáng)、回收率高，適用于MPA及其代謝物的血藥濃度監(jiān)測(cè)和人體藥動(dòng)學(xué)研究。
　　進(jìn)一步研究了28例肝移植患者服用EC-MPS后不同階段MPA及其代謝物的藥動(dòng)學(xué)特征。采集了全部患者服用EC-MPS后第1周和第3周0~12 h血標(biāo)本，采用LC-MS/MS法測(cè)定MPA、MPAG、AcMPAG血漿中藥物濃度，采用非房室法計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。服用EC-MP

6、S1周與3周后，28位患者M(jìn)PA的Cmax、AUC0-12、t1/2分別為（18.1±8.75）與（20.7±16.0）μgμmL-1、（42.7±17.5）與（47.1±23.9）μg·h·mL-1、（3.33±2.81）與（3.30±1.89）h，其主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)在第1周與第3周差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；AcMPAG的Cmax、AUC0-12、t1/2分別為（2.50±1.86）與(1.78±1.72)μg·mL-1、(14.5±11.

7、7)與(6.97±6.57)μg·h·mL-1、(4.48±2.53)與(3.76±1.89) h，給藥后第1周AcMPAG的AUC0-12顯著高于第3周(P<0.01)；MPAG的Cmax、AUC0-12、t1/2分別為(171.6±135.4)與(152.2±115.9)μg·mL-1、(1299±1204)與(1051±561)μg·h·mL-1、(8.73±4.25)與(7.75±2.87) h，MPAG的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)在第1周

8、與第3周差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。服用嗎替麥考酚酯（MMF）與EC-MPS患者的MPA的Cmax、Tmax、t1/2存在顯著差異(P<0.05)；治療3周后代謝物MPAG的Cmax、AUC0-12顯著高于服用MMF的患者(P<0.05)。結(jié)果證明不同階段MPA蓄積不明顯，與服用MMF的患者相比，EC-MPS吸收延緩，而服用不同制劑患者M(jìn)PA的體內(nèi)暴露差異并無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　在此基礎(chǔ)上，我們采用SnapShot法分析28位肝移植受

9、體與其中14位的供體的SLCO1B1、SLCO1B3、ABCB1、ABCC2等轉(zhuǎn)運(yùn)體基因多態(tài)性，并分析不同轉(zhuǎn)運(yùn)體基因型對(duì)MPA及其代謝物藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的影響。發(fā)現(xiàn)供體SLCO1B1的A388G與SLCO1B3的G669A不同基因型患者，MPA的AUC0-12(P=0.025與P=0.045)、AUC0-∞（P=0.093與P=0.055)、AUC6-12(P=0.025)存在差異；供體ABCC2-24CC基因型AUC0-12、AUC0-∞∞

10、、AUC6-12與CT型也有差異(P值分別為0099、0.067與0.079)。而肝移植受體的ABCB1基因型也對(duì)MPA體內(nèi)過程存在一定影響，ABCB13435TT型患者的AUC0-12、AUC0-∞高于CC、CT型患者(P=0.088和P=0.079)。另一方面，轉(zhuǎn)運(yùn)體基因型對(duì) MPAG的體內(nèi)暴露也存在顯著影響，14位肝移植供體不同SLCO1B1 T521C與SLCO1B3 T344G患者的AUC0-12、Cmax有顯著差異(P<0.

11、05)。轉(zhuǎn)運(yùn)體基因多態(tài)性可以部分解釋移植患者給予EC-MPS后個(gè)體差異。
　　隨后，我們利用動(dòng)物模型研究MPA在體內(nèi)的EHC過程。大鼠分為三組：第一組經(jīng)頸靜脈給予MPA聚乙二醇400溶液20mgμkg-1，尾靜脈取血并測(cè)定給藥前與給藥后0-12hMPA與代謝物血藥濃度；第二組給藥后大鼠采用膽管插管收集膽汁，測(cè)定給藥后不同時(shí)段的膽汁MPA排出量；第三組大鼠進(jìn)一步分為膽汁供體組和受體組，分離膽汁供體組大鼠膽管并將其膽汁引流入受體組大鼠

12、，分別測(cè)定供體大鼠給予MPA后兩組大鼠MPA及代謝物血濃度。經(jīng)檢測(cè)，大鼠靜脈注射給予MPA后的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過程符合二房室一級(jí)吸收模型，單次給藥后MPA的AUC為(43.3±20.4)μg·h·mL-1。MPA進(jìn)入大鼠體內(nèi)后，約8h后以MPAG的形式進(jìn)行腸肝循環(huán)后出現(xiàn)第二吸收峰。靜脈注射MPA后原型藥物在4-6h內(nèi)膽汁中排出量最多，為0.120±0.165 mg，累積膽汁排泄0.603±0.421 mg（約為給藥量的10%）。EHC模型顯示