基于漢式細(xì)胞分選技術(shù)的中國南海原綠球藻分子生態(tài)學(xué)研究.pdf

1、海洋原綠球藻(Prochlorococcus)是貧營養(yǎng)大洋的優(yōu)勢自養(yǎng)微型生物，可劃分為光生理以及16S rRNA基因系統(tǒng)發(fā)育顯著差異的兩個(gè)基本生態(tài)型，即高光生態(tài)型(High light ecotype，HL)和低光生態(tài)型(Low light ecotype，LL)。在高光生態(tài)型內(nèi)部有兩個(gè)不同的亞類，低光生態(tài)型有四個(gè)亞類，但近年來研究發(fā)現(xiàn)還存在著未知的亞類，所以尋找未知亞類是改善原綠球藻定量研究以及加深了解其環(huán)境適應(yīng)機(jī)制的必要途徑。

2、>　　 流式細(xì)胞儀是研究超微型生物的重要工具，本論文與傳統(tǒng)的膜過濾采樣方法不同，利用流式細(xì)胞儀的分選功能獲得原綠球藻濃縮樣品，并采用簡潔的凍融法提取DNA，通過克隆文庫以及變性梯度凝膠電泳法(Genaturing Gradinent GelElectrophoresis，DGGE)對(duì)中國南海陸架區(qū)域近岸A4站位三個(gè)水層(2.2 m、50.7m、75.2 m)以及菲律賓沿岸大洋站位Z97三個(gè)水層(5.0 m、30.9m、50.9 m)的

3、分選樣品進(jìn)行了原綠球藻分子生態(tài)學(xué)研究。
　　 克隆文庫的系統(tǒng)發(fā)育分析表明：所研究海域的高光生態(tài)型原綠球藻以HLII為主；低光生態(tài)型四個(gè)己知亞類中除以純培養(yǎng)株系MIT9211為代表的LLIII(該論文中的序號(hào))外其余三個(gè)已知亞類均有發(fā)現(xiàn)，同時(shí)還定義了一個(gè)新的LL型亞類LLIV。在垂直分布上，與前人研究結(jié)果一致，HL型與LL型在水柱中生態(tài)位的分離和表層混合層的深度密切相關(guān)。近岸與大洋站位之間的差異主要體現(xiàn)在LL型亞類的組成上。比較近

4、岸A4站位2.2 m、75.2 m的膜樣與同水層的分選樣品所構(gòu)建的克隆文庫，我們發(fā)現(xiàn)膜樣存在比較明顯的非特異性擴(kuò)增以及較高的聚球藻百分比含量，所以從擴(kuò)增的準(zhǔn)確性上來說，分選樣相比膜樣有很大的提高。在原綠球藻種群組成方面，兩種采樣方法的差異體現(xiàn)在兩個(gè)層面：生態(tài)型亞類組成以及各亞類相對(duì)豐度（通過克隆文庫計(jì)算得到），膜樣品與分選樣品結(jié)果的這種差異還需要加大采樣量，才能夠得到一個(gè)較為統(tǒng)一的結(jié)果。
　　 本論文同時(shí)利用變性梯度凝膠電泳DG

5、GE技術(shù)揭示了不同生境下的原綠球藻多樣性。對(duì)上升流區(qū)斷面Z96、Z97、Z99以及珠江口斷面A1、A4的研究表明，DGGE作為快速檢測原綠球藻的種群研究中是行之有效的技術(shù)。
　　 綜上所述，流式細(xì)胞儀的分選樣為海洋微型生物多樣性的研究提供了一種新的思路，在克服了少量細(xì)胞量提取DNA的困難后，所建立起來的文庫構(gòu)建和DGGE的方法可有效地揭示出中國邊緣海原綠球藻的多樣性。研究中所發(fā)現(xiàn)的LL型新亞類對(duì)(定量)PCR引物設(shè)計(jì)提供重要參考