槲皮素調(diào)節(jié)腸道菌群研究及腸道益菌飲料研制.pdf

1、目的:
　　腸道菌群是生活在人體腸道內(nèi)細(xì)菌的統(tǒng)稱，對機體健康發(fā)揮著極其重要的作用。腸道菌群協(xié)助機體抵御致病菌侵襲，同時參與消化吸收以及免疫調(diào)節(jié)等。正常人的腸道菌群相對穩(wěn)定，但是多種因素均會導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)。腸道菌群失調(diào)不僅僅是腸道生物屏障損傷，也與腸道化學(xué)屏障、免疫屏障和機械屏障相關(guān)聯(lián)，可能導(dǎo)致消化系統(tǒng)病變、循環(huán)系統(tǒng)疾病及內(nèi)分泌疾病等。調(diào)節(jié)腸道菌群可有效緩解其臨床癥狀。
　　目前主要利用直接補充益生菌活菌制劑調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)

2、，但其使用存在一些局限。天然活性物質(zhì)因其環(huán)保、高效、毒副作用小、不易產(chǎn)生耐受性等特點而越來越受到重視。槲皮素（Quercetin）是黃酮類物質(zhì)的主要成分，廣泛存在于植物的花、葉和果實中，具有抗炎、抑菌、抗氧化等多種生物活性作用，且對人體無毒性作用，長期食用安全性較高。故槲皮素可作為調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)的原料。
　　關(guān)于于槲皮素與微生物的作用，目前僅對其抑制致病菌的效果有所研究，并未研究其對益生菌的作用，且槲皮素調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)的功能也

3、未見報道。因此本課題擬動態(tài)觀察槲皮素在體外對腸道優(yōu)勢菌增殖的影響，通過動物實驗評價槲皮素調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)作用效果，同時研制一款益于腸道菌群平衡的特色食品，以明確槲皮素調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)的效果，探索其調(diào)節(jié)腸道菌群機制，并為輔助調(diào)節(jié)腸道菌群食物的研制提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1、腸道優(yōu)勢菌的分離培養(yǎng)及鑒定
　　利用選擇性培養(yǎng)基定向分離培養(yǎng)小鼠腸道優(yōu)勢菌，并根據(jù)其菌落形態(tài)和鏡下形態(tài)進(jìn)行菌種鑒定。
　　2、槲皮素對腸

4、道優(yōu)勢菌體外培養(yǎng)增殖情況的研究
　　利用光電比濁法研究槲皮素對腸球菌、腸桿菌、乳桿菌和雙歧桿菌體外增殖的影響。
　　3、槲皮素調(diào)節(jié)腸道菌群功能評價及機制探索
　　利用鹽酸林可霉素灌胃構(gòu)造小鼠腸道菌群失調(diào)動物模型，利用槲皮素進(jìn)行干預(yù)，評價槲皮素調(diào)節(jié)菌群失調(diào)效果；同時研究槲皮素干預(yù)對腸道化學(xué)屏障、免疫屏障和機械屏障的影響，探索槲皮素調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)機制。
　　4、腸道益菌飲料研制
　　以馬尾松針和火龍果等富含槲

5、皮素、果膠及其他有益于腸道菌群平衡物質(zhì)的食物為原材料，以乳酸菌為發(fā)酵劑研制腸道益菌飲料，并通過單因素實驗和正交設(shè)計實驗探索最佳發(fā)酵工藝。
　　結(jié)果:
　　1、腸道優(yōu)勢菌的分離培養(yǎng)及鑒定結(jié)果
　　本課題分離所得的菌種經(jīng)菌落形態(tài)觀察及鏡檢，符合《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊》第九版對腸球菌、腸桿菌、雙歧桿菌和乳桿菌的描述。
　　2、槲皮素對腸道優(yōu)勢菌體外培養(yǎng)增殖情況的影響
　　一定濃度范圍內(nèi)（0.01、0.05、0.1

6、μmol/mL）槲皮素對乳桿菌體外增殖有明顯的扶植作用，超過這一范圍時（0.5、1μmol/mL）槲皮素對乳桿菌增殖強烈抑制，同時，各個濃度的槲皮素均對腸球菌的體外增殖表現(xiàn)為強烈的抑制作用。槲皮素對腸桿菌體外增殖無明顯的抑制作用但也不表現(xiàn)出扶植作用，對雙歧桿菌無明顯的扶植作用但也不表現(xiàn)出抑制作用。
　　3、槲皮素調(diào)節(jié)腸道菌群功能效果
　　干預(yù)后第5天檢測菌群，發(fā)現(xiàn)槲皮素中劑量組、高劑量組和陽性對照組（麗珠腸樂組）均增加了腸道

7、雙歧桿菌數(shù)量，結(jié)果顯著（P<0.05），而其他腸道細(xì)菌變化無統(tǒng)計學(xué)差異，槲皮素通過增加腸道雙歧桿菌數(shù)量調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)。干預(yù)后第10天及第15天檢測，各個組別之間菌群變化基本無顯著差異，腸道菌群恢復(fù)平衡。槲皮素極快地加速了腸道菌群恢復(fù)。
　　4、槲皮素調(diào)節(jié)腸道菌群機制推測
　　干預(yù)后發(fā)現(xiàn)，槲皮素可提高腸道TLR2、TLR4 mRNA表達(dá)，提高腸道免疫水平，保障腸道免疫屏障功能；同時槲皮素可提高腸道Claudin-1 mRNA

8、表達(dá)，加速腸道機械屏障恢復(fù)。因此，槲皮素可通過保護(hù)和修復(fù)腸屏障調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)。
　　5、腸道益菌飲料的最佳加工工藝
　　火龍果漿添加量60％，接種量2%，發(fā)酵溫度47.5℃，所得飲料有松針和火龍果特殊風(fēng)味，口感細(xì)膩，酸度為4.38g/100g，乳酸菌活菌數(shù)為2.95×104cfu/mL。
　　結(jié)論:
　　1、槲皮素在體外可以強烈抑制腸球菌增殖，扶植乳桿菌增殖，可作為潛在的益生元進(jìn)行研究。
　　2、腸道菌群