REGγ依賴的蛋白質(zhì)降解體系構建及應用.pdf

1、蛋白酶體降解途徑是細胞中蛋白質(zhì)降解的一種重要的途徑，蛋白酶體在細胞質(zhì)和細胞漿中都大量存在。蛋白酶體對細胞具有重要的作用，它參與細胞周期、細胞凋亡、信號轉導、轉錄調(diào)控等眾多生理過程。蛋白酶體是由核心部分20s蛋白酶體及其激活因子構成，激活因子包含19s、11s及PA200。REGγ作為11s家族中的一員，它可以激活20s蛋白酶體的堿性活性位點。
　　 傳統(tǒng)觀點認為REGγ蛋白激活20s蛋白酶體僅可以降解一些短肽，因此相對于其他的蛋

2、白酶體激活因子，關于REGγ研的研究相對少一些。在2006年XiaotaoLi等人研究發(fā)現(xiàn)REGγ蛋白可激活20s蛋白酶體降解蛋白質(zhì)SRC-3，這是首次證明REGγ蛋白質(zhì)可以降解細胞內(nèi)完整的蛋白質(zhì)。此后又相繼有研究證明REGγ蛋白可以降蛋白質(zhì)p21、p19、MDM2、HCV等。這些研究成果表明，REGγ可參與細胞內(nèi)大量的生理過程。
　　 REGγ參與各種生理過程，其中一部分原理是通過對靶蛋白的蛋白水平調(diào)控來實現(xiàn)的。因此關于REG

3、雜靶蛋白的研究也是REGγ蛋白質(zhì)研究的重要方向之一。在本課題中我們通過探索各種高效液相色譜的純化方法包括：離子交換、分子篩、親和層析、疏水層析等純化出了純度較高的20s蛋白酶體和REGγ蛋白。在確定純化的20s蛋白酶體和REGγ蛋白為聚合狀態(tài)后，我們在體外將20s蛋白酶體和REGγ蛋白結合組成一個降解體系，利用已經(jīng)證明的靶蛋白p21驗證了它們的活性；同時首次利用體外實驗證明REGγ蛋白可以降解病毒蛋白HCV。這些蛋白質(zhì)的降解證明了降解體