PDTC阻斷炎癥通路減輕大鼠放射性心臟損傷的機(jī)制研究.pdf

1、目的：建立急性放射性心臟損傷（ radiation induced heart damage, RIHD）大鼠模型，觀察 RIHD急性期心肌組織病理學(xué)變化，探討其發(fā)生機(jī)制并研究吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽（pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC）對RIHD的保護(hù)作用及作用機(jī)制。
　　方法：成年雄性Sprague-Dawlay(SD)大鼠21只隨機(jī)分為三組(n=7)：空白對照組(Control組)、單純照射組（I

2、rradiation,IR組）和PDTC+照射組（PDTC+IR組）。
　　1.照射處理：單純照射組及 PDTC+照射組大鼠接受心前區(qū)局部20.0 Gy單次劑量照射，直線加速器下6 MV-X線，2.0 x2.0 cm大小射野，深度1.5 cm，劑量率1.8 Gy/min；
　　2.PDTC處理：照射前大鼠稱重，計(jì)算PDTC給藥量（120mg/kg）， PDTC+照射組大鼠在照射前30min腹腔注射PDTC，之后每天同一時(shí)間給

3、藥1次，直至照射后第14天。同時(shí)空白對照組及單純照射組每天給予相應(yīng)體積生理鹽水腹腔注射。
　　3.形態(tài)學(xué)觀察：放射線照射后第14天處死動(dòng)物進(jìn)行心肌組織病理切片染色。蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin, HE）染色觀察大鼠心肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及細(xì)胞間質(zhì)形態(tài)學(xué)改變。Masson染色觀察心肌膠原纖維表達(dá)及分布情況，應(yīng)用軟件定量分析以評價(jià)心肌纖維化程度。
　　4.生物化學(xué)檢測：放射線照射后第14天處死動(dòng)物進(jìn)行蛋白質(zhì)免疫

4、印記法（Western blot）及實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction，qPCR）法分別檢測大鼠心肌組織核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）家族成員 P50、P65，低氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia-inducible factor1α，HIF-1α）、結(jié)締組織生長因子（connective tissue growth

5、factor，CTGF）、Ⅰ型膠原（collagen typeⅠ，COL-1）蛋白及mRNA表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果：
　　1.形態(tài)學(xué)結(jié)果：(1)石蠟切片HE染色：單純照射組與空白對照組相比，心肌細(xì)胞水腫明顯，排列紊亂，部分心肌細(xì)胞斷裂；心肌細(xì)胞核輕度固縮，核染色加深，少量異形細(xì)胞核，心肌間質(zhì)可見大量炎癥細(xì)胞浸潤,成纖維細(xì)胞增多。PDTC藥物干預(yù)后再進(jìn)行照射上述損傷變化均得到改善。(2)Masson染色及定量分析：單純照射組

6、膠原纖維被染為藍(lán)綠色，廣泛分布于心肌細(xì)胞間質(zhì)，較對照組明顯增多，正常心肌細(xì)胞排列紊亂，有被膠原纖維替代的趨勢。定量分析單純照射組心肌膠原容積分?jǐn)?shù)（ collagen volume fraction, CVF）明顯高于對照組(P＜0.05)；PDTC處理后再照射CVF下降(P＜0.05)。
　　2.Western blot和qPCR結(jié)果：(1)心肌組織P50、P65蛋白表達(dá)及mRNA水平單純照射組較對照組均升高(均 P＜0.05)，

7、PDTC+照射組較單純照射組下降(均P＜0.05)；(2)心肌組織HIF-1α蛋白濃度及mRNA水平單純照射組較對照組均升高(均P＜0.05)，PDTC+照射組較單純照射組下降(均P＜0.05)；(3)心肌組織CTGF蛋白濃度及mRNA水平單純照射組較對照組均升高(均 P＜0.05)，PDTC+照射組較單純照射組均為有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)；(4)心肌組織COL-1蛋白單純照射組較對照組升高(P＜0.05)， P

8、DTC+照射組較單純照射組下降(P＜0.05)；COL-1 mRNA水平單純照射組較對照組升高(P＜0.05)，PDTC+照射組較單純照射組有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.放射線照射早期可引起心肌細(xì)胞炎癥，啟動(dòng)NF-κB炎癥反應(yīng)調(diào)控通路，組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)為心肌細(xì)胞水腫，細(xì)胞間質(zhì)大量炎癥細(xì)胞浸潤；
　　2.放射線照射早期可引起心肌細(xì)胞纖維化，組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)為細(xì)胞間質(zhì)成纖維細(xì)胞增多，膠原