SNP微陣列檢測(cè)稽留流產(chǎn)組織絨毛染色體異常.pdf

1、目的:采用絨毛細(xì)胞培養(yǎng)及染色體核型分析法與SNP微陣列技術(shù)對(duì)稽留流產(chǎn)絨毛進(jìn)行染色體檢測(cè)，比較兩種方法的優(yōu)缺點(diǎn)，查找稽留流產(chǎn)的遺傳學(xué)病因，為指導(dǎo)孕婦再次妊娠提供重要的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　方法:2013年1月至2014年3月在天津市中心婦產(chǎn)科醫(yī)院確診為稽留流產(chǎn)的患者40例，年齡25-38歲，平均年齡（32.4±5.4）歲。行人工流產(chǎn)術(shù)獲取流產(chǎn)絨毛組織。本研究的納入標(biāo)準(zhǔn)包括：有閉經(jīng)史；有腹痛、陰道流血癥狀；血、尿HCG陽(yáng)性；經(jīng)婦科檢查、超

2、聲檢查及內(nèi)分泌激素檢測(cè)等確診為稽留流產(chǎn)。隨機(jī)選取因計(jì)劃外妊娠于我院行人工流產(chǎn)術(shù)患者60例作為對(duì)照組，年齡23-44歲，平均年齡（30.9±2.3）歲。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組患者均簽署知情同意書。
　　取30mg的流產(chǎn)絨毛組織，其中15mg絨毛，用眼科小剪將其剪成糊狀裝入離心管中，加0.25％typsion EDTA（GIBCO公司）3ml于37℃搖床中振蕩消化，再加入1ml小牛血清終止消化，離心。將沉淀加入裝有4ml培養(yǎng)基（GIBCO公司

3、）的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)2-3天。進(jìn)行換液并轉(zhuǎn)瓶繼續(xù)培養(yǎng)3-5天。加入0.125%胰酶2.5ml進(jìn)行消化，再低滲、預(yù)固定、固定進(jìn)行收獲、制片、姬姆薩液中染色顯帶。然后，進(jìn)行核型分析，計(jì)數(shù)30個(gè)核型，分析5個(gè)，異常的核型計(jì)數(shù)加倍。再取15mg左右絨毛組織，采用酚-氯仿的方法提取絨毛DNA，測(cè)定DNA模板的濃度及純度，嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)流程采用Illumina Human CytoSNP-12芯片對(duì)提取的絨毛DNA進(jìn)行SNP微陣列檢測(cè)。
　　結(jié)果:

4、
　　1、絨毛培養(yǎng)結(jié)果稽留流產(chǎn)組共40例患者，其中絨毛培養(yǎng)成功29例，培養(yǎng)成功率為72.5%（29/40）。對(duì)照組60例，絨毛培養(yǎng)成功50例，培養(yǎng)成功率為83.3%（50/60）。
　　2、核型分析結(jié)果在培養(yǎng)成功的29例流產(chǎn)絨毛中，發(fā)現(xiàn)核型異常的有10例，異常率為34.5%（10/29）。其中染色體數(shù)目異常7例，包括三倍體1例，三體型6例，分別涉及9、14、15、16和22號(hào)染色體。染色體結(jié)構(gòu)異常3例，其中No.18病例10

5、號(hào)長(zhǎng)臂多出一條帶，且通過(guò)核型分析無(wú)法確認(rèn)其來(lái)源，另外2例異常分別為1例平衡易位，1例環(huán)狀染色體。對(duì)照組核型均正常。
　　3、SNP微陣列技術(shù)檢測(cè)結(jié)果稽留流產(chǎn)組40例患者，SNP微陣列技術(shù)均檢測(cè)出分子核型，成功率為100%（40/40）。發(fā)現(xiàn)異常分子核型16例，檢出率為40%（16/40）。其中染色體數(shù)目異常12例，六倍體1例，三倍體1例，三體型10例，涉及2、9、14、15、16、21和22號(hào)染色體，其中6例與絨毛培養(yǎng)結(jié)果一致，而

6、4例是絨毛培養(yǎng)未成功的。染色體結(jié)構(gòu)異常為4例：No.18病例10號(hào)染色體發(fā)生重復(fù)；No.6病例同時(shí)發(fā)現(xiàn)了9號(hào)染色體的微重復(fù)和20號(hào)染色體微缺失；No.15病例3號(hào)染色體及No.22病例12號(hào)染色體發(fā)生UPD；No.6病例、No.15病例及 No.22病例應(yīng)用絨毛培養(yǎng)核型分析法均未發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)異常。而絨毛培養(yǎng)核型分析發(fā)現(xiàn)的平衡易位和環(huán)狀染色體，由于沒(méi)有微缺失和重復(fù)，在SNP微陣列檢測(cè)中的結(jié)果是正常的。對(duì)照組分子核型均正常。
　　4、統(tǒng)計(jì)