化療藥物對小鼠T細胞歸巢至二級淋巴器官的影響及機制的初步研究.pdf

1、目的:
　　化療是治療腫瘤的主要方法之一，但是由于化療藥物自身的缺陷和對機體無選擇性的殺傷，導致化療藥物不能徹底的清除腫瘤細胞。有研究顯示，化療的腫瘤患者普遍免疫力低下，有近半數(shù)的腫瘤患者在癌癥侵襲或者器官衰竭前就死于感染。
　　眾所周知，抗瘤免疫的主要細胞是腫瘤抗原特異性T細胞。T細胞不僅作為腫瘤抗原特異性的T細胞，發(fā)揮殺傷腫瘤細胞的效應，而且還在機體對抗感染中也起到重要作用。T細胞要發(fā)揮作用，必須先被趨化到二級淋巴器官中

2、的T細胞區(qū)，與同樣被趨化的抗原遞呈細胞相互作用，活化、增殖，進而進入外周器官發(fā)揮殺傷腫瘤或者抗感染效應。T細胞被趨化因子趨化進入二級淋巴器官的T細胞區(qū)這個過程也叫做歸巢。因此T細胞歸巢的質(zhì)和量決定著機體免疫效應的質(zhì)量，趨化足夠量的T細胞歸巢到二級淋巴器官是機體發(fā)揮免疫效應的基礎。T細胞主要受到二級淋巴器官中g(shù)p38+CD31-的基質(zhì)細胞——成纖維網(wǎng)狀細胞(FRCs)分泌的趨化因子CCL21、CCL19的趨化，通常是CCL21在T細胞的歸

3、巢中發(fā)揮著主要作用。以往有研究表明，減少淋巴組織中趨化因子的平衡穩(wěn)定的表達，會減少T細胞和DCs在T細胞區(qū)的相遇，從而削弱免疫反應強度。
　　因此，我們課題組想研究化療藥物對二級淋巴器官有什么影響？對T細胞歸巢有什么樣的改變？在預實驗中我們發(fā)現(xiàn)，化療后小鼠脾臟T細胞被趨化到脾臟的數(shù)量減少，而這個現(xiàn)象的原因是脾臟基質(zhì)細胞分泌的趨化因子的減少。為了更深入的研究T細胞及二級淋巴的基質(zhì)細胞在化療中受到的影響，我們選擇了臨床上治療肺癌常用的

4、順鉑、吉西他濱、5-FU三種化療藥物，通過建立小鼠化療模型，研究化療對二級淋巴器官的基質(zhì)細胞及T細胞歸巢的影響，闡明這三種藥物對二級淋巴器官及免疫細胞的影響及可能的機制。
　　方法:
　　1.建立小鼠化療模型，通過流式細胞技術(shù)、免疫熒光等技術(shù)觀察小鼠T細胞在二級淋巴器官的歸巢情況。
　　2.通過免疫熒光、酶聯(lián)吸附試驗(Elisa)檢測、RT-PCR等檢測小鼠二級淋巴器官中趨化因子CCL21、CCL19的表達。
　

5、　3.結(jié)合小鼠脾臟基質(zhì)細胞體外分離培養(yǎng)，通過流式細胞技術(shù)、免疫熒光技術(shù)檢測其凋亡情況，明確化療藥物對脾臟基質(zhì)細胞凋亡的作用。
　　結(jié)果:
　　1.化療藥物順鉑、吉西他濱、5-FU治療后，小鼠脾臟基質(zhì)細胞表達的CCL21明顯降低，歸巢的T細胞明顯減少。
　　2.化療藥物順鉑、吉西他濱、5-FU治療后，小鼠淋巴結(jié)趨化的T細胞與對照組無明顯差異。其分泌的趨化因子CCL21、CCL19無明顯差異。
　　3.化療藥物順鉑、