巴多昔芬對(duì)大鼠子宮內(nèi)膜異位癥作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景和目的：
　　子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，EMs）是發(fā)生在育齡期婦女常見的一種雌激素依賴的慢性疾病，主要表現(xiàn)為慢性下腹痛、痛經(jīng)和不孕。病因?yàn)樽訉m內(nèi)膜出現(xiàn)在了子宮以外的部位如盆腔腹膜、卵巢、直腸陰道膈、心包膜和胸膜，甚至出現(xiàn)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中。盆腔子宮內(nèi)膜異位癥在育齡期婦女中發(fā)病率為10-15％，具有疼痛、不孕癥狀占35-50%。
　　目前用于治療子宮內(nèi)膜異位癥的藥物主要目的在于減少內(nèi)源性雌激素的產(chǎn)生，患者長(zhǎng)

2、期用藥后出現(xiàn)的低雌激素癥狀而使這些藥物在臨床使用中具有一定的局限性。尋找既能抑制和消除異位病灶的生長(zhǎng)，又可提高妊娠率和降低復(fù)發(fā)率，且副作用低，患者依從性好的臨床治療藥物，是EMs臨床藥物治療的目標(biāo)及基礎(chǔ)研究的方向。
　　巴多昔芬對(duì)雌激素受體作用具有組織選擇性，與骨組織、血清脂質(zhì)代謝、凝血系統(tǒng)中雌激素受體結(jié)合表現(xiàn)為激動(dòng)劑作用，而與乳腺和子宮組織中的雌激素受體結(jié)合則表現(xiàn)為拮抗作用，有望成為治療子宮內(nèi)膜異位癥的一種新藥。本研究通過巴多昔

3、芬治療大鼠EMs，觀察治療前后異位病灶的肉眼形態(tài)、體積、組織病理學(xué)和大鼠體重及治療后子宮濕重變化，并通過免疫組織化學(xué)（免疫組化）法檢測(cè)大鼠EMs在位子宮內(nèi)膜和異位病灶中PCNA、ER及PR的表達(dá)，評(píng)估巴多昔芬對(duì)大鼠EMs模型異位病灶的作用及分析其可能作用機(jī)制，為EMs的臨床治療提供新的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　材料和方法：
　　1.材料
　　健康清潔級(jí)雌性未孕SD大鼠30只，鼠齡：60～90天，體重200～250g，購(gòu)自河

4、南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
　　2.方法
　　觀察大鼠的發(fā)情周期，選連續(xù)觀察2個(gè)正常動(dòng)情周期的大鼠進(jìn)行建模。建模前一天給予適量的雌激素，使大鼠均處于發(fā)情期。與動(dòng)情期行皮下種植 EMs模型建立。將供體大鼠的子宮內(nèi)膜組織剝離后剪成5×5mm大小的片段，種植于受體大鼠的腹肌與皮下筋膜層之間，術(shù)后肌注硫酸慶大霉素0.1ml預(yù)防感染，連續(xù)3天，3周后選取建模成功20只大鼠，隨機(jī)分為巴多昔芬組（3mg/kg·d灌胃，n=10）和對(duì)照組（每日等體

5、積量的生理鹽水灌胃，n=10），在用藥前用游標(biāo)卡尺測(cè)量并計(jì)算異位病灶的體積V1（V=0.52×長(zhǎng)×寬×高，單位為mm3），連續(xù)用藥4周后，再次用游標(biāo)卡尺測(cè)量異位病灶的體積V2（計(jì)算方法同上）。觀察治療前后異位病灶形態(tài)、體積變化及大鼠體重變化和治療后子宮濕重的變化。無菌條件下取各組大鼠在位子宮內(nèi)膜與異位病灶組織，10%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋,切片，HE染色光鏡觀察病灶腺體、間質(zhì)和上皮的變化，免疫組化法測(cè)定兩組大鼠EMs模型治療后在位子

6、宮內(nèi)膜和異位病灶中增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、雌激素受體（ER）和孕激素受體（PR）表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型異位病灶形成情況
　　建模3周后第二次開腹檢查移植物生長(zhǎng)情況，30只大鼠中有23只大鼠異位病灶形成，建模成功率為：76.67%（23/30）。建模成功的大鼠模型中子宮內(nèi)膜異位病灶肉眼觀：移植物呈囊泡樣增大，內(nèi)含淡黃色或清亮囊液，在囊壁表面可見有新生血管形成。
　　2.兩組大鼠E

7、Ms治療前后異位病灶肉眼形態(tài)和組織形態(tài)學(xué)變化
　　巴多昔芬治療前，兩組大鼠EMs模型異位病灶呈囊泡狀增大，內(nèi)含淡黃色或清亮積液，表面可見小血管。組織病理學(xué)觀察可見生長(zhǎng)良好的腺體和間質(zhì)，腺體數(shù)目較在位子宮內(nèi)膜少，囊腔內(nèi)可見炎性細(xì)胞。用藥4周后，與對(duì)照組相比，巴多昔芬組異位病灶明顯萎縮，異位病灶中腺體數(shù)目減少或消失，間質(zhì)內(nèi)血管減少。
　　3.兩組大鼠EMs治療前后體重變化
　　治療前兩組大鼠體重：對(duì)照組(200.80±16

8、.84) g，巴昔芬組：(202.40±17.85) g；治療后兩組大鼠體重：對(duì)照組(260.90±15.50) g，巴多昔芬組(265.50±16.44) g。治療前后大鼠體重各組間均未見明顯差異(P>0.05)。
　　4.兩組大鼠EMs治療后子宮濕重的變化
　　治療后對(duì)照組子宮濕重:(0.77±0.16) g，巴多昔芬組子宮明顯變細(xì)，子宮濕重(0.45±0.18) g，較對(duì)照組明顯減輕(P<0.05)。
　　5.兩

9、組大鼠治療前后異位病灶體積的變化
　　種植后異位病灶隨時(shí)間的增長(zhǎng)體積都有減小趨勢(shì)，治療前大鼠EMs異位病灶的體積：對(duì)照組(84.67±17.16) mm3，巴多昔芬組(84.74±12.03) mm3，兩組異位病灶體積差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P>0.05），治療后異位病灶的體積：對(duì)照組(48.09±10.59) mm3，巴多昔芬組(24.27±8.74) mm3，較對(duì)照組體積明顯減少（P<0.05），較治療前巴多昔芬組體積也明顯減?。?/p>

10、P<0.05）。
　　6.治療后兩組大鼠EMs模型異位病灶中PCNA、ER及PR蛋白的表達(dá)情況
　　免疫組化結(jié)果顯示PCNA、ER和PR在大鼠異位病灶中腺上皮細(xì)胞、腔上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)均有表達(dá)，其中以腺上皮細(xì)胞表達(dá)為強(qiáng)。異位病灶對(duì)照組中PCNA、ER及PR蛋白染色平均光密度分別為：(0.282±0.044)、(0.507±0.065)、(0.493±0.053)，巴多昔芬組PCNA、ER及PR蛋白染色平均光密度的表達(dá)分別為

11、：(0.191±0.020)、(0.233±0.034)、(0.484±0.058)。與對(duì)照組相比，巴多昔芬組異位病灶中PCNA及ER的表達(dá)量明顯減少（P<0.05），而PR的表達(dá)量卻未見明顯的變化（P>0.05）
　　7.治療后兩組大鼠EMs模型在位子宮內(nèi)膜中PCNA、ER及PR蛋白的表達(dá)情況
　　免疫組化結(jié)果顯示PCNA、ER和PR在大鼠在位子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞、腔上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)均有表達(dá)，其中以腺上皮細(xì)胞表達(dá)為強(qiáng)。在

12、位子宮內(nèi)膜對(duì)照組中 PCNA、ER及 PR蛋白染色平均光密度分別：(0.369±0.081)、(0.559±0.080)、（0.563±0.097），巴多昔芬組PCNA、ER及PR蛋白染色平均光密度的表達(dá)分別為(0.211±0.037)、(0.275±0.055)、(0.538±0.078)。與對(duì)照組相比，巴多昔芬組異位病灶中PCNA及ER的表達(dá)量明顯減少（P<0.05），而PR的表達(dá)量卻未見明顯的變化（P>0.05）。
　　結(jié)論